1、目的: 應(yīng)用高效毛細(xì)管電泳(HPCE)技術(shù)，建立一種可同時(shí)檢測(cè)隨機(jī)尿中香草扁桃酸(VMA)、高香草酸(HVA)和肌酐(creatinine，Cr)的方法，以輔助診斷嗜鉻細(xì)胞瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤等相關(guān)疾病。 方法: 1．采用標(biāo)準(zhǔn)品和尿液為分析樣品，分別對(duì)緩沖體系、分離模式、檢測(cè)波長(zhǎng)、分離電壓及毛細(xì)管規(guī)格等電泳條件進(jìn)行優(yōu)化，以實(shí)現(xiàn)尿中各待測(cè)物與周圍雜峰的基線分離。 2．對(duì)本研究建立的HPCE法進(jìn)行系統(tǒng)的方法學(xué)評(píng)價(jià)

2、，包括：線性范圍與檢出限、重復(fù)性試驗(yàn)、回收試驗(yàn)、干擾試驗(yàn)以及方法學(xué)對(duì)比試驗(yàn)。 3．收集、檢測(cè)健康成人及兒童隨機(jī)尿標(biāo)本各100份，分別建立成人與兒童的VMA/Cr、HVA/Cr參考值范圍(μmol/mmol)；并以本法對(duì)5例嗜鉻細(xì)胞瘤及2例神經(jīng)母細(xì)胞瘤患者的隨機(jī)尿標(biāo)本進(jìn)行定量分析。 4．選取健康志愿者、嗜鉻細(xì)胞瘤及神經(jīng)母細(xì)胞瘤患者各1例，分別連續(xù)留取5份隨機(jī)尿標(biāo)本并采用本法進(jìn)行測(cè)定，以動(dòng)態(tài)觀察各待查者尿液VMA、HVA的周

3、期性排泌特點(diǎn)。 結(jié)果: 1．在毛細(xì)管區(qū)帶電泳(capillaryzoneelectrophoresis，CZE)模式下，以120mmol/LNaH2PO4—Na2HPO4(pH6.80)溶液為緩沖液，在非涂層石英毛細(xì)管(47cm×75μm內(nèi)徑)中進(jìn)行電泳。樣品稀釋后直接經(jīng)壓力進(jìn)樣(1p．S．i．，4s)，20kV電壓下電泳分離后，通過二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)(λ=200nm)。在該電泳條件下，尿液Cr、VMA和HVA在13m

4、in內(nèi)即可完全出峰，與周圍雜峰達(dá)到基線分離。 2．線性評(píng)價(jià)結(jié)果顯示，VMA、HVA和Cr分別在0～500、0～500和0～4000μmol/L濃度范圍內(nèi)呈良好線性，相關(guān)系數(shù)?介于0.9972～0.9991(P＜0.001)；最低檢出限(S/N=3)分別為1.0、1.0和50.0μmol/L。 3．尿液VMA、HVA和Cr遷移時(shí)間的平均批內(nèi)(n=10)變異系數(shù)(CV)分別為0.58％、0.56％和0.25％，平均批間(n=

5、10)CV分別為0.95％、1.00％和0.48％；峰面積的平均批內(nèi)(n=10)CV分別為3.78％、3.97％和2.76％，平均批間(n=10)CV分別為4.60％、4.08％和4.42％。 4．本法具有較高準(zhǔn)確性，VMA、HVA和Cr的平均回收率分別為98.36％、93.56％和98.85％；兒茶酚胺、5-羥色胺和清蛋白等對(duì)檢測(cè)結(jié)果無干擾。 5．方法學(xué)對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果顯示，本法與HPLC法有較好的相關(guān)性，兩種方法測(cè)得VM

6、A、HVA濃度的相關(guān)系數(shù)分別為0.9549(P＜0.001)和0.9451(P＜0.001)。 6．健康成人與兒童隨機(jī)尿標(biāo)本的VMA/Cr、HVA/Cr比值均呈偏態(tài)分布(n=100)，以百分位數(shù)法建立其95％參考值，成人尿液VMA/Cr、HVA/Cr的參考值分別為0～4.26和0～1.69(μmol/mmol)，兒童尿液VMA/Cr、HVA/Cr的參考值分別為0～10.39和0～4.31(μmol/mmol)。 7．通過

7、對(duì)3例待查者隨機(jī)尿中VMA、HVA含量的動(dòng)態(tài)觀察，我們發(fā)現(xiàn)，由于受到體內(nèi)兒茶酚胺動(dòng)態(tài)分泌以及尿液濃縮、稀釋等因素影響，人體尿液VMA、HVA的濃度在一天內(nèi)呈現(xiàn)較大波動(dòng)；而相對(duì)比值VMA/Cr和HVA/Cr則較穩(wěn)定，數(shù)值變化幅度較小，從而證實(shí)了Cr對(duì)隨機(jī)尿中VMA、HVA含量的糾正作用，同時(shí)也說明了以VMA/Cr、HVA/Cr為檢測(cè)指標(biāo)的科學(xué)性與合理性。 結(jié)論: 該法可同時(shí)檢測(cè)隨機(jī)尿中VMA、HVA和Cr含量，樣品用量少，