1、目的：用體外實(shí)驗(yàn)的研究方法，觀察硫酸鈹（BeSO4）致人胚肺成纖維細(xì)胞（MRC-5）活性氧（ROS）的變化、相關(guān)凋亡基因 c-fos、bcl-2、bax、Caspase-3的表達(dá)水平及細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度及三磷酸肌醇受體（IP3R）表達(dá)的改變，探討硫酸鈹是否通過(guò)影響活性氧和鈣離子導(dǎo)致人胚肺細(xì)胞損傷，同時(shí)觀察枸杞多糖（LBP）是否對(duì)硫酸鈹致人胚肺細(xì)胞損傷具有保護(hù)作用。
　　方法：體外培養(yǎng)人胚肺成纖維細(xì)胞，共分為空白對(duì)照組、硫酸鈹?shù)椭懈邉?/p>

2、量組、枸杞多糖保護(hù)組及枸杞多糖對(duì)照組等6組。硫酸鈹給予劑量分別為0、1、10、100μmol/L，枸杞多糖劑量為10μmol/L。細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，達(dá)到細(xì)胞密度后，加入藥物培養(yǎng)24h收集細(xì)胞，分別進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)：1.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）；2.免疫組化（SP）法檢測(cè)c-fos、bcl-2、bax、Caspase-3相關(guān)的表達(dá)3.激光共聚焦法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)[Ca2+]的水平；4.RT-PCR測(cè)定三磷酸肌醇受體(I

3、P3R)的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1．BeSO4中、高劑量組ROS含量與空白對(duì)照組相比明顯增高，表達(dá)細(xì)胞數(shù)增多，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　2.細(xì)胞加藥培養(yǎng)24h后，免疫組化結(jié)果顯示： BeSO4低、中、高劑量組 c-fos、bcl-2表達(dá)均高于空白對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且隨著藥物劑量增加表達(dá)水平不斷增高。BeSO4中、高劑量組bax表達(dá)均低于空白對(duì)照組、BeSO4低、中、高劑量組Casp

4、ase-3表達(dá)均低于空白對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）且隨著藥物劑量增加表達(dá)水平不斷降低。
　　3.硫酸鈹高劑量組細(xì)胞內(nèi) Ca2+濃度明顯高于空白對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　4.激光共聚焦顯微鏡下，100μmol/L BeSO4組中，細(xì)胞核呈現(xiàn)出明亮的綠色熒光，細(xì)胞分界清楚呈梭型，BeSO4+LBP組細(xì)胞呈圓形，胞體淡綠色，細(xì)胞周圍可見(jiàn)綠色熒光小點(diǎn)。
　　5.BeSO4低、中、高劑量組Ⅲ型

5、 IP3R表達(dá)與空白對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01）；
　　6.LBP對(duì)BeSO4損傷細(xì)胞的保護(hù)作用：BeSO4組ROS含量高于空白對(duì)照組（P<0.01）、LBP組ROS含量低于空白對(duì)照組（P<0.01），二者具有交互作用（P<0.05）。對(duì)于bcl-2、Caspase-3的表達(dá) BeSO4和LBP具有交互效應(yīng)（P<0.05或P<0.01）。Ca2+和IP3R檢測(cè)結(jié)果顯示BeSO4和LBP具有交互作用（P<0.05或P

6、<0.01）。
　　結(jié)論：
　　1.BeSO4可致MRC-5細(xì)胞內(nèi)ROS含量升高，LBP對(duì)此有一定保護(hù)作用。
　　2.BeSO4可致MRC-5細(xì)胞內(nèi)的c-fos、bcl-2基因表達(dá)量升高；bax、Caspase-3基因表達(dá)量減少，LBP對(duì)此有一定的調(diào)節(jié)作用。
　　3.BeSO4可致MRC-5細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度升高，LBP對(duì)其有一定保護(hù)作用。
　　4.BeSO4可能通過(guò)IP3R受體通道，造成MRC-5細(xì)胞鈣超載