1、本研究以來(lái)自本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的T-DNA插入突變體庫(kù)（以日本睛為遺傳背景）為研究材料。通過(guò)對(duì)苗期材料進(jìn)行PEG篩選試驗(yàn)，獲得一份干旱敏感的突變體dsm1，通過(guò)模擬干旱試驗(yàn)、結(jié)合生理指標(biāo)分析等，并通過(guò)圖位克隆手段，對(duì)控制該突變體的基因進(jìn)行精細(xì)定位，圖位克隆了DSM1基因。本實(shí)驗(yàn)具體研究結(jié)果如下:
　　1.干旱敏感突變體dsm1的篩選與驗(yàn)證:通過(guò)利用PEG等模擬不同非生物脅迫條件，測(cè)定丙二醛和含水量等生理指標(biāo)，進(jìn)行抗旱驗(yàn)證。結(jié)果表明，與野

2、生型日本晴相比，突變體dsm1對(duì)干旱脅迫表現(xiàn)出極度敏感性，在復(fù)水后表現(xiàn)出枯黃至死亡，且突變體植株葉片細(xì)胞的所測(cè)各項(xiàng)生理指標(biāo)參數(shù)均明顯改變。
　　2.突變體dsm1與野生型的農(nóng)藝性狀比較:與野生型相比，突變體dsm1對(duì)干旱敏感表型出現(xiàn)在三葉期。在成熟期，突變體dsm1伴有窄葉表型，其他表型均與野生型同。以該表型作為農(nóng)藝性狀統(tǒng)計(jì)篩選材料的表型。
　　3.圖位克隆:由于干旱是數(shù)量性狀，極難克隆基因。本論文中利用窄葉表型代替干旱表型

3、，經(jīng)過(guò)初定位，將DSM1基因定位到第4染色體上，再經(jīng)過(guò)精細(xì)定位，將DSM1基因定位到80 kb范圍內(nèi)，其中一個(gè)基因LOC_Os04g52479發(fā)生了單堿基突變，由胞嘧啶突變?yōu)轼B嘌呤，導(dǎo)致氨基酸的替換，即精氨酸變?yōu)楦拾彼?。我們將LOC_0s04g52479定位候選基因。
　　4.互補(bǔ)試驗(yàn)。構(gòu)建含有LOC_Os04g52479全長(zhǎng)CDS的雙元表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化突變體dsm1，獲得一批212份陽(yáng)性轉(zhuǎn)化植株。在T1代進(jìn)行抗逆(PEG)篩選，部