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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
1、探討脊髓損傷繼發(fā)性損害的機(jī)制;2、研究環(huán)孢素A對(duì)大鼠急性脊髓損傷后繼發(fā)性損害的保護(hù)作用。
方法:采用改良Allen's法建立大鼠急性脊髓損傷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。將成年SD大鼠隨機(jī)分為單純椎板切除陰性對(duì)照組(A組)、急性脊髓損傷組(B組)和急性脊髓損傷后小劑量環(huán)孢素A治療組(C組),C組在損傷后早期從尾靜脈注射小劑量環(huán)孢素A治療。各組大鼠于損傷后1、7、14、28d應(yīng)用BBB評(píng)分評(píng)價(jià)神經(jīng)功能狀況;分別在術(shù)
2、后1、3、7、14d處死各組大鼠,分別取受損節(jié)段脊髓行HE染色及免疫組化染色觀察形態(tài)學(xué)變化;應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)(RealTime-PCR)方法觀察OMgp mRNA的表達(dá);同時(shí)應(yīng)用Westenr-blot方法測(cè)定各組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)OMgp表達(dá)量。
結(jié)果:
1、神經(jīng)功能學(xué)BBB評(píng)分:與對(duì)照組相比,損傷組和治療組大鼠神經(jīng)功能明顯減退,損傷組功能減退最為顯著,治療組的BBB評(píng)分明顯優(yōu)于損傷組,差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義
3、。
2、脊髓損傷區(qū)域的HE染色改變:光鏡下見(jiàn)損傷后1d時(shí)灰質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)片狀出血、中央?yún)^(qū)碎裂,軸突中斷及脫髓鞘改變;3d時(shí)神經(jīng)元腫脹,細(xì)胞核固縮,空洞形成,膠質(zhì)細(xì)胞減少;7d殘存神經(jīng)元數(shù)量減少,膠質(zhì)細(xì)胞增生,膠質(zhì)疤痕形成;14d脊髓損傷區(qū)出現(xiàn)囊腔樣變。
3、免疫組織化學(xué)觀察:OMgp陽(yáng)性反應(yīng)位于少質(zhì)膠質(zhì)細(xì)胞及神經(jīng)元細(xì)胞膜,在大鼠急性損傷脊髓組織中,OMgp表達(dá)量明顯增加,對(duì)照組神經(jīng)元中有少量OMgp陽(yáng)性表達(dá),損傷后
4、OMgp的表達(dá)逐漸增高,損傷7d時(shí)OMgp表達(dá)明顯達(dá)到高峰,然后緩慢下降,至14d時(shí)表達(dá)仍高對(duì)照組。在小劑量CsA治療的大鼠急性損傷脊髓組織中各個(gè)時(shí)間點(diǎn)OMgp的表達(dá)量較損傷組明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
4、Westem-bloting和RT-PCR檢測(cè):在蛋白和mRNA水平OMgp表達(dá)趨勢(shì)一致,對(duì)照組可見(jiàn)OMgp mRNA和蛋白的少量表達(dá),脊髓損傷后1d表達(dá)開(kāi)始增加,7d時(shí)表達(dá)達(dá)到高峰,損傷組與治療組比
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