1、背景與目的：
　　碘是一種人體必需的微量元素，但碘攝入過量會導致甲狀腺的形態(tài)發(fā)生改變，形成甲狀腺腫大。甲狀腺膠質(zhì)潴留是甲狀腺腫大的表現(xiàn)之一，主要表現(xiàn)為甲狀腺濾泡腔膠質(zhì)堆積。流行病學調(diào)查發(fā)現(xiàn)，高碘所致的甲狀腺腫大患病率逐年提高。因此，研究高碘對人體危害的機制，以及發(fā)現(xiàn)有效的干預高碘危害的措施，成為當下急需解決的重要問題。
　　甲狀腺疾病常常伴隨著甲狀腺激素水平紊亂，甲狀腺激素的合成涉及一系列環(huán)節(jié)，碘的有機化是其中的重要環(huán)節(jié)之一

2、。碘有機化過程會產(chǎn)生大量過氧化氫，過量碘攝入可能會導致機體出現(xiàn)過氧化物堆積，造成氧化損傷，引起機體甲狀腺膠質(zhì)潴留。已有研究發(fā)現(xiàn)，在給予高碘的同時補充硒能在一定程度上控制甲狀腺腫大，這可能與硒干預氧化損傷調(diào)節(jié)有關。機體內(nèi)參與過氧化物分解的谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)，作為TSH第二信使參與甲狀腺細胞內(nèi)信號傳遞的硫氧還蛋白家族(TR)，以及催化甲狀腺激素脫碘代謝的脫碘酶(DIO)都是含硒酶。因此，硒對甲狀腺激素代謝和機體氧化還原水平調(diào)

3、節(jié)起著重要作用。硒的營養(yǎng)狀態(tài)、硒酶的活性、硒酶的表達水平等是否會影響甲狀腺膠質(zhì)潴留的形成，以及其干預機制值得進行研究。
　　硒具有抗氧化、抗炎癥、參與免疫調(diào)節(jié)等作用，已被營養(yǎng)學會列入可作為食品添加劑的營養(yǎng)素。有機硒安全性高且吸收性好，可作為機體補硒的良好來源，具有很大的開發(fā)應用前景。已知松針富含硒、黃酮類物質(zhì)和低聚原花青素等多種抗氧化活性物質(zhì)，其包含的有機硒蛋白有較好的羥基自由基的清除能力，故松針可作為富硒抗氧化功能食品開發(fā)的原料

4、。
　　本課題擬建立7個月的小鼠硒干預過量碘致甲狀腺膠質(zhì)潴留模型，研究硒對甲狀腺膠質(zhì)形成過程中相關的氧化還原酶的活性、激素水平和基因表達情況等方面的影響，為進一步闡明硒干預過量碘致甲狀腺膠質(zhì)潴留的作用機理提供有價值的研究資料。同時，擬以馬尾松松針提取液為原料，以硒含量及抗氧化能力為功能檢測指標，研究硒含量適宜、抗氧化能力較強的富硒抗氧化食品的配方及生產(chǎn)工藝。
　　方法：
　　1.實驗動物及分組
　?、亠曫B(yǎng)：SPF

5、級BALB/C雌性小鼠240只，體重10-14g，3-4周齡，健康狀況佳。適應性喂養(yǎng)2周后，隨機分成8組，每組30只，每組分別給予自來水及含不同劑量KIO3高碘水，和/或Na2SeO3富硒水，連續(xù)喂養(yǎng)7個月。
　　②劑量及分組如下：A組（正常對照組）：自來水；C組（碘干預組）：碘3000μg/L；S1組（補硒1組）：硒200μg/L；S2組（補硒2組）：硒300μg/L；S3組（補硒3組）：硒400μg/L；SD1組（硒干預碘1組

6、）：碘3000μg/L，硒200μg/L；SD2組（硒干預碘2組）：碘3000μg/L，硒300μg/L；SD3組（硒干預碘3組）：碘3000μg/L，硒400μg/L。
　　2.動物標本采集及制備
　?、倌蛞海禾幩狼皩⑿∈笾糜诖x籠內(nèi)，自由進食進水，收集清晨3小時尿液。②血清：摘取小鼠眼球取血，3500rpm離心10min取血清，-20℃冰箱保存。③甲狀腺組織：在處死前對小鼠稱重，處死后迅速摘取分離小鼠甲狀腺，除去表面結締

7、組織等，置于濾紙上稱重，甲狀腺樣本置于4％多聚甲醛固定，或用液氮急凍10s置于-80℃冰箱保存，待檢測。
　　3.指標檢測
　?、倌虻鉁y定：采用碘催化砷鈰法尿碘試劑盒，定期測定小鼠尿碘水平。
　?、诩谞钕贁z碘率測定：給小鼠灌胃0.5 Mci I125，分別測量灌胃后20min和2h小鼠甲狀腺的放射性計數(shù)，本底計數(shù)和標準源計數(shù)，計算小鼠甲狀腺攝碘率。
　?、奂谞钕偌に貦z測：利用促甲狀腺激素免疫放射分析藥盒，游離甲狀

8、腺素放射免疫分析藥盒，和游離三碘甲腺原氨酸放射免疫分析藥盒分別測定血清 TSH、FT4、FT3。
　　④甲狀腺組織病理學及超微結構觀察：制作甲狀腺組織石蠟切片并進行 HE染色觀察組織病理學改變；制作甲狀腺組織透射電鏡樣本觀察組織超微結構改變。
　　⑤甲狀腺基因測定：用 qPCR法檢測甲狀腺組織中 Slc5a5(NIS)、Slc26a4(Pendrin)、IYD、Slc16a2(Mct8)、DIO1、TG、TPO、DUOX2、

9、PRX1的mRNA表達。
　?、扪逖趸€原相關指標的測定：利用試劑盒測定小鼠血清GPH-Px、SOD的活性以及MDA的含量。
　　4.松針富硒功能食品的研制
　　以松針提取液、脫脂奶粉為原料，以硒含量及抗氧化能力為功能檢測指標，通過單因素實驗，正交設計，感官評定等方法，確定松針富硒功能酸奶的最佳工藝和配方。
　　結果：
　　1.硒干預過量碘致小鼠甲狀腺膠質(zhì)潴留的效果
　　與正常組 A組比較，各組小鼠

10、體重差異無統(tǒng)計學意義。小鼠甲狀腺臟器/體重指數(shù)各組較A組升高，其中C組、SD2組、SD3組有顯著性差異（P＜0.05）。
　　與正常對照組A組相比，碘干預組（C組）以及硒干預碘組（SD1、SD2、SD3組）尿碘水平明顯增高，有統(tǒng)計學差異（P＜0.01）。
　　過量碘可致甲狀腺膠質(zhì)潴留產(chǎn)生，主要表現(xiàn)為膠質(zhì)樣組織形態(tài)學改變，濾泡細胞結構受損；補充硒可以減緩甲狀腺膠質(zhì)潴留程度，使濾泡細胞趨于正?；苊阁w、膠質(zhì)滴增多。
　　

11、各組隨著時間的延長，攝碘率都較前有所升高，其中A組與S1組2h的攝碘率明顯高于20min的攝碘率，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　長期過量碘可致血清甲狀腺激素水平分泌異常，表現(xiàn)為TSH、FT4水平升高，F(xiàn)T3水平降低，有統(tǒng)計學差異（P＜0.01）；補充硒可以升高血清FT3，降低血清FT4，有統(tǒng)計學差異（P＜0.01）。硒補充可使血清激素水平向正常水平恢復。
　　2.硒干預過量碘致小鼠甲狀腺氧化損傷致膠質(zhì)潴留機制研究

12、結果
　　與A組相比， C組小鼠血清GSH-Px活性降低；硒干預碘組（SD1、SD2、SD3組）GSH-Px活性低于正常組但高于C組，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　與A組相比， C組小鼠血清SOD活性降低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。硒干預碘組SD1、SD2組血清SOD活性較C組明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　與 A組相比， C組小鼠血清 MDA含量明顯升高，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0

13、.001）。與C組相比，硒干預碘組（SD1、SD2、SD3組）MDA含量明顯降低，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.001）。
　　與A組相比，C組TPO、DUOX2、PRX1 mRNA表達下調(diào)，部分基因表達差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。與C組相比，硒干預碘組SD1組TPO、PRX1 mRNA表達上調(diào)，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。補充硒能提高氧化還原相關酶基因的表達。
　　與C組比較，硒干預碘組SD1組NIS、Pen

14、drin、IYD、MCT8、DIO1基因上調(diào)，差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；與A組比較，硒干預碘組SD1組Pendrin、IYD、MCT8、DIO1基因下調(diào)，差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。與A比較， C組Pendrin、MCT8 mRNA表達上調(diào)差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。補充硒能提高碘合成、運輸和釋放過程部分基因的表達。
　　3.松針富硒功能酸奶的研制結果
　　松針富硒抗氧化酸奶的最佳配方和工藝為：

15、以松針提取液為溶劑，全脂奶粉質(zhì)量分數(shù)14%，白砂糖質(zhì)量分數(shù)15%，富硒酵母質(zhì)量分數(shù)0.075%，穩(wěn)定劑明膠質(zhì)量分數(shù)0.1%，發(fā)酵劑質(zhì)量分數(shù)0.14%，發(fā)酵溫度為45℃，發(fā)酵時間為9 h。
　　松針富硒抗氧化酸奶硒含量0.31 mg/kg，總抗氧化能力為22.57 U/mL，符合富硒抗氧化功能酸奶的要求。
　　結論：
　　1.補充硒能在一定程度上降低甲狀腺膠質(zhì)潴留的程度，降低過量碘對甲狀腺造成損傷的程度。
　　2.