1、背景和目的:
　　妊娠期高血壓疾病是孕期特有的疾病,發(fā)病率在5％-8%,造成的孕產婦死亡約占妊娠相關死亡總數(shù)的10%-16%。該病病因不明,治療上唯一確切有效的手段就是終止妊娠。對PE病因學的研究已經歷了半個多世紀,近年來主要集中在血管內皮損傷、免疫系統(tǒng)Th1/Th2的失衡、過氧化物損害以及胎盤源性不良因子釋放等方面。公認的兩階段病因學說認為,妊娠早期階段,在遺傳易感性及免疫耐受失調等多因素作用背景下,滋養(yǎng)細胞侵襲不足,胎盤淺著床

2、,為該病埋下隱患;妊娠晚期階段:胎盤源性因子大量異常釋放入母血,引起母體血管內皮功能紊亂、全身性炎癥應答加強,繼而出現(xiàn)高血壓、蛋白尿等子癇前期癥狀。而隨著妊娠終止,胎盤娩出,母體PE癥狀及實驗室改變迅速恢復正常,故有學者認為PE可能是一個胎盤源性疾病。
　　正常妊娠晚期時孕婦全身各系統(tǒng)均會表現(xiàn)相應的變化,其中外周血的 APTT、PT縮短,FIB升高,孕婦機體處于血液高凝狀態(tài),為預防分娩出血奠定基礎。血液及凝血系統(tǒng)的這一改變屬于妊娠

3、晚期的生理過程。而 PE孕婦血液及凝血系統(tǒng)的改變與正常孕婦差異較大,且在發(fā)病的早期階段即出現(xiàn)了這一異常改變。PE的嚴重并發(fā)癥-HELLP綜合征,臨床上出現(xiàn)血小板減少、溶血、肝酶升高,為該病引起凝血功能損害的重度表型。但迄今為止,PE患者血液及凝血系統(tǒng)的變化規(guī)律、與疾病的嚴重程度,影響這一病理變化的核心分子及病因機制尚不明了。既往研究多集中在 PE患者外周血中凝血物質的改變,包括促凝物質TAT、可溶性纖維蛋白及TM、蛋白C、AT-Ⅲ等指標

4、。而臨床輔助檢查的結果,僅能從現(xiàn)象上提示 PE患者有凝血機能的變化,其對疾病的變化影響、嚴重程度的判定、如何指導臨床診治尚缺乏清晰的思路,且導致PE孕婦血液及凝血功能異常的中心環(huán)節(jié)尚無合理解釋,因此,有深入研究的必要。
　　近些年,胎盤形成過程中的功能狀態(tài)及后續(xù)的胎盤源性不良因子釋放增加在 PE發(fā)病中的作用受到越來越多的關注。胎盤源性不良因子包括類花生酸類、sFlt-1、合體滋養(yǎng)細胞微絨毛膜(syncytiotrophoblast

5、 microvillous membrane,STBM)、過氧化物類分子等,可能在子癇前期的發(fā)生發(fā)展中起重要的作用。STBM是一種含有合體滋養(yǎng)細胞胞質及信號的帶膜囊泡狀結構。正常妊娠孕婦外周血中STBM脫落釋放,發(fā)揮著母胎界面信號傳導和營養(yǎng)物質交換作用,它的脫落受滋養(yǎng)細胞激活和凋亡的影響,不斷順應機體發(fā)生生理或病理的變化。而已有研究觀察到PE患者外周血STBM含量顯著增加,尤其在早發(fā)型PE則更為明顯。體外實驗認為STBM可能通過抑制血管

6、內皮細胞的增殖、破壞其單層分布結構、干擾小動脈的舒張功能,調節(jié)機體炎性因子釋放和調控細胞免疫等多種途徑影響母體免疫系統(tǒng),導致PE的發(fā)生。我課題組前期研究發(fā)現(xiàn),STBM在小鼠體內可以誘發(fā)子癇樣改變,成功構建了小鼠子癇前期/子癇模型,但尚未進一步研究STBM在模型鼠各器官及系統(tǒng)的功能改變。結合PE孕婦外周血STBM顯著上調及血液凝血系統(tǒng)變化的客觀證據(jù),我們推測,STBM可能對孕婦凝血功能產生影響,導致組織器官缺血缺氧、干擾細胞正常代謝,引起

7、器官功能障礙,最終子癇前期及子癇發(fā)生。但其具體作用模式及途徑有待進一步研究。
　　材料和方法:
　　(一)子癇前期孕婦不同孕期凝血功能的變化
　　1.研究對象第三軍醫(yī)大學第三附屬醫(yī)院常規(guī)產檢并分娩的PE及正常孕婦
　　2.血液的采集用含抗凝劑的真空采血管取孕婦靜脈血,離心得血漿,2小時內上機檢測。
　　3.指標檢測用全自動儀測凝血5項和血小板指標。
　　4.數(shù)據(jù)整理、統(tǒng)計運用EXCEL及SPSS軟件處

8、理數(shù)據(jù)。
　　(二) STBM上調對小鼠凝血功能的影響
　　1.STBM的制備與鑒定取正常孕17天的C57BL/6小鼠,無菌條件制備STBM、測蛋白含量、掃描電鏡驗證。
　　2.實驗分組已孕組分為五組,分別是PBS組(P-CTL)、低濃度STBM組(P-S-L)、中濃度組 STBM(P-S-M)、高濃度 STBM組(P-S-H)、高濃度 STBM+肝素組(P-S-H+heprin);未孕組為中濃度STBM組(NP-S-

9、M)。自孕10天起,尾靜脈注射相應液體0.2ml/d;P-S-H組、P-S-H+heprin組孕17天時注射。
　　3.采集小鼠血標本麻醉下挖眼取小鼠的血并離心制血漿,取肺臟和腦組織后處死小鼠。將血漿標本保存于-20°C,組織用多聚甲醛固定24h后包蠟,常溫保存。
　　4.檢測凝血五項在全自動凝血儀上測定凝血指標(APTT、PT、D-D)。
　　5.檢測凝血物質按照 ELISA試劑要求,分別測凝血酶復合物(TAT)、活

10、化蛋白C(APC)、抗凝血酶(AT-III)、凝血調節(jié)蛋白(TM)、組織因子(TF)及組織因子途徑抑制物(TFPI)六項指標。
　　5.孕鼠肺、腦組織的HE染色,在光鏡下進行觀察,采集圖像。
　　結果:
　　(一)子癇前期孕婦不同孕期凝血功能的變化
　　在正常妊娠組、wPE組、sPE組孕婦,晚孕期外周血漿FIB水平均較早孕期顯著升高(P<0.05),APTT均顯著縮短(P<0.05);與正常妊娠、wPE組比較,s

11、PE組孕婦晚孕期TT顯著升高(P<0.05),D-D值顯著升高(P<0.05),差異有統(tǒng)計學意義,PT無明顯改變;在正常妊娠、wPE、sPE組孕婦,晚孕期外周血PLT水平均顯著降低(P<0.05), MPV顯著上調(P<0.05),差異有統(tǒng)計學意義,PDW、PCT未見明顯改變。
　　(二) STBM上調對小鼠凝血功能的影響
　　制備的 STBM總蛋白含量為0.73±0.10mg/ml,掃描電子顯微鏡下可見直徑約200-500

12、nm的囊泡狀結構成團簇擁,部分發(fā)生融合,符合STBM固有特征。
　　1.小鼠的凝血五項
　　與P-CTL組比較,P-S-M組的APTT縮短(P<0.05),PT縮短(P<0.05),D-D增高不明顯。P-S-L組與NP-S-M組無明顯變化。
　　2.小鼠各項凝血物質比較
　　隨著STBM濃度的升高,TAT、APC、TF、TFPI呈升高趨勢。與P-CTL組比較, P-S-M組以及 NP-S-M組的 TF/TFPI均

13、顯著升高(P<0.05),P-S-L組變化不明顯。與P-CTL組和 P-S-H+heprin組,P-S-H組的 TAT顯著上調( P=0.02)、APC也明顯升高(P<0.05)。與P-S-M組對比,NP-S-M組各值無明顯變化。
　　3.小鼠血栓形成
　　P-S-H組較之P-CTL組小鼠的肺臟及腦病理切片中,見均質紅染無結構的物質填滿血管內腔,考慮透明血栓形成。
　　結論:
　　1.子癇前期患者的外周血中STB