1、目的：骨關(guān)節(jié)炎(Osteoarthritis，OA)，又名骨關(guān)節(jié)病，是一種表現(xiàn)為關(guān)節(jié)軟骨退化和關(guān)節(jié)邊緣新骨生成，即骨贅生成的關(guān)節(jié)疾病。膝關(guān)節(jié)OA在OA中最為常見(jiàn)，是引起膝關(guān)節(jié)痛的主要原因之一，并且發(fā)病率隨年齡而增加，是影響老年人運(yùn)動(dòng)及慢性殘疾的首要原因，因此尋找一種安全、高效的治療方法，已成為醫(yī)學(xué)研究者關(guān)注的熱點(diǎn)。本課題以膝關(guān)節(jié)注射 MIA 形成的膝關(guān)節(jié) OA 的大鼠模型為研究對(duì)象，從而探討膝關(guān)節(jié) OA 動(dòng)物模型膝關(guān)節(jié)組織結(jié)構(gòu)的改變及艾

2、灸對(duì)其影響，在分子水平上研究艾灸對(duì)膝關(guān)節(jié) OA 大鼠膝關(guān)節(jié)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1 (Transforming Growth Factor-β1，TGF-β1)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β3 (Transforming Growth Factor-β3，TGF-β3)及蛋白多糖(Proteoglycan，PTG)表達(dá)的影響及其作用機(jī)理，從而評(píng)價(jià)艾灸干預(yù)膝關(guān)節(jié) OA 發(fā)生發(fā)展的可行性，為臨床治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：選用2月齡雄性 Wistar 大鼠

3、 39 只，體重175-200g，隨機(jī)分為正常組、模型組、艾灸組，每組 13 只。將除正常組以外的2組大鼠用10％水合氯醛按4ml/kg的標(biāo)準(zhǔn)腹腔注射麻醉，在無(wú)菌條件下，穿過(guò)髕下韌帶，予以膝關(guān)節(jié)內(nèi)注射，右膝注射 MIA，按1mgMIA：50μl生理鹽水標(biāo)準(zhǔn)稀釋，左膝注射50μl 生理鹽水，標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng) 28 天后將各組大鼠各隨機(jī)處死一只，取其關(guān)節(jié)軟骨做蘇木精-伊紅染色，光鏡觀察關(guān)節(jié)軟骨組織結(jié)構(gòu)變化是否符合骨性關(guān)節(jié)炎變化，以確定造模成功。1.

4、28 天后開(kāi)始治療，正常組、造模組不做任何處理，開(kāi)始進(jìn)行艾灸治療，取右側(cè)膝眼，采用溫和灸，20 分鐘/次，距離皮膚2～3 cm，1次/日，10 天為1療程，療程間休息1天，共治療3個(gè)療程。治療時(shí)以5％異氟烷(與空氣混合)輕度吸入性麻醉。2.末次治療后禁食 24 小時(shí)后處死，取整個(gè)膝關(guān)節(jié)。將其中一半樣本用 5％甲酸脫鈣，常規(guī)石蠟包埋，7μm 連續(xù)切片，貼于 APES 防脫片膠處理的載玻片備染。另一半樣本置于RPMI medium/0.1％

5、BSA，溫箱中培養(yǎng) 10 小時(shí)。3.采用免疫組織化學(xué)方法(ABC法)檢測(cè)TGF-β1和TGF-β3；酶聯(lián)免疫法檢測(cè)TGF-β1、TGF-β3 的含量；組織化學(xué)染色法測(cè)定骨贅大小及軟骨中PTG的含量。 結(jié)果：1．膝關(guān)節(jié)注射 MIA 可形成典型的實(shí)驗(yàn)性膝關(guān)節(jié) OA 大鼠模型，造模大鼠的膝關(guān)節(jié)軟骨骨贅面積與正常大鼠相比，明顯增多，有非常顯著性差異(P<0.01)。2．實(shí)驗(yàn)性膝關(guān)節(jié) OA 大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨中PTG的含量較正常組降低。經(jīng)統(tǒng)計(jì)

6、學(xué)處理，有非常顯著性差異(P<0.01)。3．實(shí)驗(yàn)性膝關(guān)節(jié) OA 大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨中TGF-β1、TGF-β3 的表達(dá)及含量較正常組明顯升高。造模組大鼠的 TGF-β1 含量，與正常組相比，有顯著性差異(P<0.05)；造模組大鼠的 TGF-β3含量，與正常組相比，有非常顯著性差異(P<0.01)。4．艾灸“膝眼”穴治療可明顯降低實(shí)驗(yàn)性膝關(guān)節(jié) OA 大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨骨贅面積，艾灸治療組膝關(guān)節(jié)軟骨骨贅面積與造模組比較，有非常顯著性差異(P<0

7、.01)。5．艾灸“膝眼”穴治療可提高實(shí)驗(yàn)性膝關(guān)節(jié) OA 大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨中 PTG的含量，與造模組比較，有非常顯著性差異(P<0.01)。6．艾灸“膝眼”穴治療可明顯降低實(shí)驗(yàn)性膝關(guān)節(jié) OA 大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨TGF-β1、TGF-β3 的表達(dá)含量。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，艾灸治療組TGF-β1 含量與造模組比較，有顯著差異(P<0.05)；艾灸治療組TGF-β3與造模組相比，有非常顯著性差異(P<0.01)。 結(jié)論：艾灸“膝眼”穴可延緩或改善