1、本文旨在分離甘藍(lán)型油菜中赤霉素代謝關(guān)鍵酶的基因，并對(duì)其功能進(jìn)行分析，為探索赤霉素代謝關(guān)鍵酶基因及其表達(dá)調(diào)控在雜種優(yōu)勢(shì)形成中的分子機(jī)理奠定基礎(chǔ)，同時(shí)對(duì)油菜的遺傳轉(zhuǎn)化體系進(jìn)行了優(yōu)化，獲得以下主要結(jié)果： 1.利用擬南芥赤霉素代謝關(guān)鍵酶基因的序列在Genbank中尋找油菜中相應(yīng)基因的ESTs(expression sequence tags，ESTs)序列并進(jìn)行拼接，設(shè)計(jì)引物利用PCR技術(shù)從油菜(Brassica napus)cDNA或

2、基因組中分離了赤霉素代謝關(guān)鍵酶基因BnGA30x1，BnGA30x2和BnGA200x1。序列分析表明，BnGA30xJ全長1648bp，推測(cè)含有一561bp的內(nèi)含子，編碼358個(gè)氨基酸：BnGA30x2 ORF為1077bp,編碼358個(gè)氨基酸；BnGA200x1 ORF為1134bp,編碼377個(gè)氨基酸。與擬南芥相應(yīng)基因所編碼的氨基酸的同源性分別達(dá)到81.6％，87.6％和81.7％。 2.構(gòu)建了35S啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的植物過表達(dá)

3、載體pBnGA30x1，pBnGA30x2，pBnGA200x 1和RNPd表達(dá)載體pBnGA30x2RNAi,pBnGA200x1RNAi。 3.利用葉盤法將BnGA30x1,BnGA30x2和BnGA200x1分別轉(zhuǎn)入煙草，轉(zhuǎn)基因煙草表現(xiàn)出生長速度快，生物產(chǎn)量高，花期提早等典型的赤霉素生理作用的性狀。Northern blottig表明，轉(zhuǎn)基因在煙草體內(nèi)獲得了過量表達(dá)。通過赤霉素GA<,3>含量測(cè)定，轉(zhuǎn)基因植株分別比對(duì)照增加

4、31.9％，17.7％和28.1％。 4.以甘藍(lán)型油菜“中雙九號(hào)”的子葉柄為外植體，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化體系，獲得了經(jīng)pBnGA30x1，pBnGA200x1和pBnGA200x1RNAi轉(zhuǎn)化的油菜植株，分別是16株，17株和2株。通過對(duì)外植體愈傷的形成和分化、抗性芽生成及植株再生的狀況的觀察，“中雙九號(hào)”適于作為遺傳轉(zhuǎn)化的受體。 5.本研究發(fā)現(xiàn)，高濃度的卡那霉素對(duì)油菜外植體愈傷的形成和芽的分化具有明顯的抑制作用且不