1、 目的：1. 探討銅綠假單胞菌氨基糖苷類抗菌藥物的耐藥表型和氨基糖苷類修飾酶基因的分布及其關(guān)系。2. 對氨基糖苷類耐藥菌株進(jìn)行分子分型,以監(jiān)測耐藥菌株的流行情況,為臨床合理使用抗生素,減少耐藥菌株的產(chǎn)生及醫(yī)院感染管理提供科學(xué)依據(jù)。方法：1. 收集本院2011年9月-2012年6月臨床分離的銅綠假單胞菌。2. 用MicroScan WalkAway 96SI全自動(dòng)微生物鑒定/藥敏測試系統(tǒng)鑒定銅綠假單胞菌并得到銅綠假單胞菌對 15 種抗菌

2、藥物的耐藥情況,篩選出對氨基糖類抗菌藥物耐藥的菌株。3. 利用聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction,PCR)技術(shù)檢測氨基糖類耐藥的銅綠假單胞菌株,攜帶6種氨基糖苷類修飾酶基因情況。4. 陽性基因擴(kuò)增產(chǎn)物上海生工測序,測序結(jié)果與 GenBank 數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對。5. 以6 種氨基糖苷類修飾酶基因作為分子標(biāo)記,進(jìn)行多基因聚類分析,以了解我院銅綠假單胞菌的流行情況。6. 采用基因外重復(fù)回文序列-聚合酶鏈反應(yīng)(rep

3、etitive extragenic palindromic-polymerase chain reaction,REP-PCR)對銅綠假單胞菌進(jìn)行分子分型。7. 采用表面增強(qiáng)激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜( Surface enhanced laser desorption/ionization-time of flight mass spectrometry,SELDI-TOF MS)技術(shù)對銅綠假單胞菌進(jìn)行分子分型。結(jié)果：1.收集到的82

4、株銅綠假單胞菌對亞胺培南的耐藥率最高,為85.4%；對阿米卡星、慶大霉素、妥布霉素、頭孢曲松鈉、頭孢他啶、頭孢噻肟、頭孢吡肟、環(huán)丙沙星、加替沙星、左氧氟沙星、哌拉西林/他巴唑、替卡西林/克拉維酸、哌拉西林、氨曲南的耐藥率在39%-68.9%之間。2. 82株菌中有49株對阿米卡星、慶大霉素、妥布霉素氨基糖苷類抗菌藥物耐藥,33株對這三種氨基糖苷類抗菌藥物敏感。3. 6 種氨基糖苷類修飾酶基因共檢出 5種,其中aac (3)-Ⅱ,19株(

5、38.8%)；aac(6′)-I,19株(38.8%)；aac(6′)-Ⅱ,18株(36.7%)；ant (2″)-Ⅰ,35株(71.4%)；ant(3″)-I,13株(26.5%)。4. 5種陽性氨基糖苷類修飾酶基因測序結(jié)果與GenBank中的已提交的相應(yīng)基因序列的同源性為98%-100%。5. 經(jīng)多基因聚類分析、REP-PCR技術(shù)、SELDI-TOF MS 技術(shù)分別將 49 株氨基糖苷類耐藥的銅綠假單胞菌株分為為3群7亞群11型、分

6、為3群6亞群13型和3群6亞群12型,并且存在克隆流行菌株。6. 采用SELDI-TOF MS技術(shù)分析氨基糖苷類耐藥菌株和氨基糖苷類敏感菌株發(fā)現(xiàn) 25 個(gè)差異蛋白峰,其中質(zhì)荷比為 9900.024、7600.041、9101.253、10372.874的四個(gè)峰最具差異性。結(jié)論：1. 49株氨基糖苷類耐藥的銅綠假單胞菌ant (2″)-Ⅰ的攜帶率最高,并且以只攜帶ant (2″)-Ⅰ修飾酶基因的菌株和同時(shí)攜帶ant (2″)-Ⅰ、aac(