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1、第一部分可降解生物材料PLGA仿生礦化的實(shí)驗(yàn)研究 目的:通過(guò)對(duì)PLGA的仿生礦化表面改性,以提高其生物學(xué)活性;探討影響仿生礦化的因素和條件,檢測(cè)礦化過(guò)程對(duì)PLGA支架材料孔隙率及生物力學(xué)強(qiáng)度的影響,為進(jìn)一步制備組織工程化人工骨提供依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法:PLGA膜經(jīng)堿性溶液水解處理后,應(yīng)用高溫顯微鏡測(cè)量材料表面潤(rùn)濕角的變化;堿處理后的PLGA膜和三維多孔PLGA分別在0.5倍SBF中礦化20天,在SBF中礦化14天,在1
2、.5倍SBF中礦化9天,應(yīng)用掃描電鏡進(jìn)行礦化物形貌觀(guān)察,X射線(xiàn)能譜分析鈣磷比值,X射線(xiàn)衍射儀和傅立葉轉(zhuǎn)換紅外光譜儀行礦化物物相分析,比重法測(cè)量礦化前后材料孔隙率的變化,津島生物力學(xué)測(cè)試儀測(cè)試材料礦化前后抗壓強(qiáng)度的變化。 結(jié)論:PLGA仿生礦化是制備結(jié)構(gòu)及性質(zhì)類(lèi)似骨基質(zhì)人工骨的可行方法。 第二部分大鼠BMSCs的培養(yǎng)和鑒定 目的:大鼠BMSCs的體外獲取并鑒定,為進(jìn)一步行材料生物學(xué)性能的檢測(cè)提供細(xì)胞來(lái)源。
3、方法:取幼年SD大鼠骨髓,分離骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,觀(guān)察細(xì)胞形態(tài)特征、生長(zhǎng)狀況,從表面抗原表達(dá)及生物學(xué)行為兩個(gè)方面進(jìn)行鑒定。 結(jié)論:分離培養(yǎng)的細(xì)胞成分單一,鑒定為BMSCs,可以應(yīng)用于材料生物學(xué)性能的檢測(cè)。 第三部分PLGA仿生礦化對(duì)大鼠BMSCs粘附增殖和成骨分化的影響 目的:通過(guò)檢測(cè)大鼠BMSCs在仿生礦化后PLGA表面粘附、增殖和成骨分化的行為,進(jìn)一步了解仿生礦化改性對(duì)PLGA生物學(xué)性能的影響,為進(jìn)一步構(gòu)建仿生
4、礦化人工骨提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法:將培養(yǎng)的大鼠BMSCs分別接種于未礦化的PLGA和礦化后的PLGA上,同時(shí)以煅燒松質(zhì)骨材料為對(duì)照,以間接計(jì)數(shù)法測(cè)定細(xì)胞接種24小時(shí)后的細(xì)胞粘附率;通過(guò)細(xì)胞DNA熒光定量檢測(cè)法測(cè)定細(xì)胞在各組材料上增殖的情況,并繪制細(xì)胞增殖曲線(xiàn);應(yīng)用RT-PCR的方法測(cè)定各組材料上大鼠BMSCs成骨基因表達(dá)情況,通過(guò)比較成骨基因表達(dá)時(shí)間先后次序和量的變化,表明各組材料對(duì)BMSCs向成骨細(xì)胞分化的影響。 結(jié)論:
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