1、目的:
　　 缺血性腦血管病是嚴(yán)重危害人類健康的常見病、多發(fā)病之一，具有高發(fā)病率、高致殘率、高致死率的特點(diǎn)。目前關(guān)于缺血性腦血管病的研究主要集中在缺血梗死灶的局部，而對與缺血梗死相關(guān)聯(lián)的腦組織、細(xì)胞的損傷研究較少。近年來，有研究表明，腦梗死治療效果差的原因不僅與梗死灶局部神經(jīng)元死亡密切相關(guān)，與遠(yuǎn)隔部位損傷也有著不容忽視的作用，且可能影響腦梗死的預(yù)后。
　　 膠質(zhì)源性纖維酸性蛋白（glial fibrillary acid

2、ic protein，GFAP）是星形膠質(zhì)細(xì)胞的一種主要中間纖維蛋白，被作為星形膠質(zhì)細(xì)胞成熟活化的標(biāo)志蛋白，其表達(dá)數(shù)目增加一定程度上反映了腦組織受損的程度。酪氨酸羥化酶(Tyrosine of enzyme，TH)在中腦的黑質(zhì)致密部分布密度最高，被用來標(biāo)志腦內(nèi)多巴胺能神經(jīng)元，TH活性的下降，DA合成減少，進(jìn)而DA能神經(jīng)元細(xì)胞變性、壞死，還增加細(xì)胞外源性毒物的敏感性，加重腦組織損害。因此，黑質(zhì)內(nèi)TH陽性細(xì)胞計數(shù)可以間接反映DA能神經(jīng)元功能

3、的變化。
　　 標(biāo)準(zhǔn)銀杏葉提取物(Ginkgo biloba extract，EGb761)，主要含24％的銀杏黃酮苷(flavonoid)和6％的萜烯內(nèi)酯(terpenoid)等多種活性物質(zhì)。EGb761在腦缺血時對神經(jīng)元保護(hù)作用的研究較多，而其對神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞抗缺血損傷作用的研究卻很少受到關(guān)注，其對遠(yuǎn)隔部位損傷方面的保護(hù)作用及其機(jī)制尚不清楚。
　　 本研究通過建立大鼠大腦中動脈內(nèi)栓線阻斷法(MCAO)腦梗死模型，探討急

4、性腦缺血再灌注后大鼠中腦黑質(zhì)部位星形膠質(zhì)細(xì)胞、多巴胺能神經(jīng)元、細(xì)胞凋亡的變化及EGb761的干預(yù)作用，為臨床治療提供理論依據(jù)。
　　 材料與方法:
　　 1.實(shí)驗(yàn)動物與分組：清潔級健康雄性SD大鼠54只，體重220±30g，隨機(jī)分為三組：假手術(shù)組，模型組，EGb761干預(yù)組，每組18只，每組再分為三個不同時間點(diǎn)1天、3天、7天，每個時間點(diǎn)6只大鼠。
　　 2.模型的制作：參照Longa的大鼠大腦中動脈內(nèi)栓線阻斷法

5、(MCAO)適當(dāng)改良后進(jìn)行。建立大腦中動脈缺血再灌注模型，假手木組除不插線外，余步驟同其它兩組。術(shù)后觀察同側(cè)Horner氏征及對側(cè)肢體癱瘓體征來判斷模型是否成功。
　　 3.動物給藥方法：將標(biāo)準(zhǔn)銀杏葉提取物(EGb761)金納多片研成粉末狀，用蒸餾水溶解并混勻配成濃度為5mg/ml的溶液，術(shù)后24小時按照0.5ml/100g灌胃，假手術(shù)組和模型組給予等量生理鹽水灌胃。各組灌胃均每日一次，直至處死。
　　 4.標(biāo)本的收集與

6、處理：模型制作成功后大鼠分別于1d、3d、7d時，10％水合氯醛(2.5ml/kg)麻醉下，心臟灌注，斷頭取腦，固定后制作石蠟切片，供HE染色、免疫組化染色、TUNEL檢測用。
　　 5.觀察指標(biāo)：(1)HE染色觀察腦組織病理變化；(2)免疫組化染色檢測大鼠腦組織梗死后中腦黑質(zhì)部位GFAP、TH免疫染色陽性細(xì)胞數(shù)的表達(dá)情況；(3)TUNEL檢測細(xì)胞凋亡情況。
　　 6.統(tǒng)計方法：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x-)±s）表示

7、，應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。以α=0.05作為顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　 結(jié)果:
　　 1.HE染色：假手術(shù)組中腦黑質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)緊密，層次清晰，神經(jīng)元偶見變性、壞死，大部分細(xì)胞形態(tài)正常未見明顯的病理變化；模型組細(xì)胞排列稀疏，結(jié)構(gòu)紊亂，神經(jīng)元數(shù)目明顯減少，可見大量變性、壞死的神經(jīng)元，可見胞核皺縮、碎斤出現(xiàn)，細(xì)胞周圍有間隙，空泡變性；EGb761干預(yù)組神經(jīng)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)破壞及神經(jīng)元變性、壞死較模型組明顯減輕。
　

8、　 2.GFAP免疫組化染色：各組取同側(cè)黑質(zhì)部位進(jìn)行觀察，計數(shù)GFAP免疫染色陽性細(xì)胞個數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。假手術(shù)組GFAP陽性細(xì)胞數(shù)有少量表達(dá)，各組間差別無顯著意義。1d、3d、7d時GFAP陽性細(xì)胞表達(dá)，模型組分別為12.17±2.04:19.00±1.78、25.33±2.12;干預(yù)組：10.00±1.41、14.33±2.73、17.16±1.47。模型組各時間點(diǎn)GFAP陽性細(xì)胞數(shù)均明顯多于假手術(shù)組和干預(yù)組，7d時陽性細(xì)胞數(shù)較1d

9、、3d多，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。
　　 3.細(xì)胞凋亡的檢測：TUNEL檢測細(xì)胞凋亡陽性數(shù)目，假手術(shù)組各時間點(diǎn)未見陽性細(xì)胞。1d、3d、7d時陽性細(xì)胞數(shù)，模型組：12.23±4.97、39.40±6.94、26.18±6.53；干預(yù)組：7.31±1.92、20.26±4.61、12.23±3.70。模型組和干預(yù)組均有大量凋亡陽性細(xì)胞，且均3d時最多，干預(yù)組較模型組明顯減少，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。

10、　　 4.TH免疫組化：TH為胞質(zhì)和胞膜著色，陽性細(xì)胞顯示深棕黃色或深褐色。1d、3d、7d時各組陽性細(xì)胞數(shù)分別為：假手術(shù)組23.39±1.14、24.87±1.98、23.79±2.23；模型組11.67±1.36、8.87±2.43、6.15±1.09：干預(yù)組18.68±1.29、14.38±0.71、10.17±1.82。與假手術(shù)組比較，缺血再灌注后各時間點(diǎn)，中腦黑質(zhì)TH陽性細(xì)胞表達(dá)減少，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，干預(yù)組