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文檔簡介
1、目的:探討吉非替尼及紫杉醇對血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)及內(nèi)皮細(xì)胞(EC)增殖的影響及其可能機(jī)制。
方法:(1)以不同濃度(0μmol/L、10-2μmol/L、10-1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L)及不同干預(yù)時(shí)間(24h、48h、72h)的吉非替尼及紫杉醇分別作用于VSMC和 EC,以0μmol/L作為對照組,溴化四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法測定兩種藥物對兩種細(xì)胞增殖的影響,并計(jì)算出增殖抑制率。(2)取1μmo
2、l/L吉非替尼及紫杉醇分別干預(yù)VSMC和EC48小時(shí),RIPA試劑盒抽提細(xì)胞總蛋白。用Bradford蛋白分析試劑盒測量所提取蛋白濃度,通過免疫印跡法(western-blotting)檢測兩種細(xì)胞經(jīng)藥物干預(yù)后Bcl-2、Caspase-3蛋白的表達(dá)。(3)取1μmol/L吉非替尼干預(yù)VSMC和EC48小時(shí),通過western-blotting檢測EGFR及磷酸化EGFR(p-EGFR)、Akt及磷酸化Akt(p-Akt)蛋白水平變化。
3、
結(jié)果:(1)吉非替尼及紫杉醇對VSMC、EC的增殖均有明顯的抑制作用,并且這種抑制作用呈劑量及時(shí)間的依賴性。在10-2-10-1μmol/L的濃度,吉非替尼對VSMC的抑制率和紫杉醇相比基本類似,但隨著濃度的增加及作用時(shí)間的延長,其抑制率明顯增加甚至超過紫杉醇;而在10-2-10μmol/L,相同濃度和相同作用時(shí)間,吉非替尼對EC的抑制率均明顯低于紫杉醇。(2)和對照組相比,吉非替尼和紫杉醇分別干預(yù)VSMC及EC兩種細(xì)胞后,
4、細(xì)胞的Bcl-2蛋白的表達(dá)均有明顯減少(p<0.05),Caspase-3蛋白的表達(dá)明顯增加(p<0.05),但VSMC變化更明顯;(3)EGFR在VSMC上的表達(dá)明顯高于EC(p<0.01)。吉非替尼作用后,VSMC中EGFR蛋白的磷酸化明顯受到抑制;在吉非替尼作用下,VSMC及EC的Akt蛋白的磷酸化受到一定程度的抑制,而VSMC更明顯。
結(jié)論:吉非替尼與紫杉醇相比,可同樣有效抑制VSMC的增殖并促進(jìn)細(xì)胞凋亡,但對EC增殖
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