1、廣東醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文腺病毒介導(dǎo)存活素RNA干涉對人乳腺癌裸鼠移植瘤抑制作用的研究姓名：謝富華申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：梁念慈20070501腺病毒介導(dǎo)存活素R N A 干涉對人乳腺癌裸鼠移植瘤抑制作用的研究摘要目的探討腺病毒介導(dǎo)的R N A 干涉( R N A i n t e r f e r e n c e , R N A i ) 沉默存活素C S a r v i v i n )表達(dá)后，誘導(dǎo)人乳腺癌細(xì)胞株M

2、 C F - 7 凋亡的情況，并進(jìn)一步研究S u r v i v i n 表達(dá)受抑制后對M C F - 7 細(xì)胞裸鼠人乳腺癌移植瘸的抑制作用．方法以S h u t t l eV e c t o r 1 ．0 - C M V 為載體構(gòu)建人s u r r ／v ／n 基因的4 個短發(fā)夾R N A ( s h o r t h a i r p i n R N A ，s h R N A ) 表達(dá)質(zhì)粒，其中一個為陰性對照；脂質(zhì)體法將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人乳腺癌

3、細(xì)胞株M C F - 7 ，通過比較各m K N A 的轉(zhuǎn)錄水平篩選出沉默效果最強(qiáng)的表達(dá)質(zhì)粒。構(gòu)建攜帶所篩選的s u r v ／v ／ns h R N A 表達(dá)質(zhì)粒和陰性對照質(zhì)粒的重組腺病毒( A d - s w - , , ／v ／n 和A d 刪蜘1 ) ；流式細(xì)胞術(shù)檢測該艨病毒介導(dǎo)的R N A i效應(yīng)。建立入乳腺癌腫瘤模型：將M C T - 7 細(xì)胞種植到B l a b ／c - n u ／n u 裸小鼠的右前肢腋下：將成瘤的裸鼠

4、隨機(jī)分為三組，分別予P B S 、A d - c o n 血' o l 病毒懸液和A d - s u r t 州n 病毒懸液行瘤周和瘤體注射，同時觀察腫瘤生長情況；藥物處理結(jié)束后。收集標(biāo)本，常規(guī)嗣片觀察組織學(xué)情況，并通過免疫組織化學(xué)檢測S u r v i v i n 蛋白表達(dá)情況．結(jié)果成功構(gòu)建針對人s u r r i r i ns h R N A 的表達(dá)質(zhì)粒；R T - P C R 法篩選出沉默效果最強(qiáng)的質(zhì)粒。成功構(gòu)建攜帶人s

5、u r v ／v ／n s h R N A 表達(dá)質(zhì)粒的重組腺病毒；流式細(xì)胞術(shù)檢測：腺病毒介導(dǎo)s u r r ／v ／ns h R N A 作用M C F - 7 細(xì)胞后導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。成功建立人乳腺癌腫瘤模型：給藥后實(shí)驗(yàn)組移植瘤的生長速度慢于對照組；免疫組織化學(xué)檢測發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組的S u r v i v i n 蛋白表達(dá)受到抑制．結(jié)論1 ．構(gòu)建的人3 1 0 “ 1 P ／V ／? 1 s h R N A 表達(dá)質(zhì)粒，從m R N A 水平證實(shí)