1、目的：研究環(huán)氧合酶-2(cyclooxygenase-2COX-2)是否在氧誘導的鼠視網膜新生血管上表達及COX-2抑制劑Rofecoxib是否抑制視網膜新生血管的形成及其作用機制。 方法：第一部分：出生后7d的C57BL/6J幼鼠28只隨機分成正常對照組14只，在正常空氣環(huán)境下飼養(yǎng)10天。給氧組14只，在高氧環(huán)境下飼養(yǎng)5天，然后回到正?？諝猸h(huán)境下飼養(yǎng)5天。熒光素血管灌注觀察視網膜血管形態(tài)，HE染色計數與內界膜有關系的血管內皮細

2、胞核。免疫組織化學檢測視網膜中COX-2、VEGF蛋白表達；RT-PCR檢測COX-2和VEGFmRNA。 第二部分：同日出生的2窩C57BL/6J小鼠各10只，隨機分為治療組和未治療組。同時置于高氧環(huán)境下飼養(yǎng)5天后，在正常環(huán)境中飼養(yǎng)，治療組每日1次腹腔注射COX-2抑制劑Rofecoxib15mg/kg，未治療組注入等量的生理鹽水，連續(xù)5d。熒光素血管灌注觀察視網膜血管形態(tài)，HE染色計數與內界膜有關系的血管內皮細胞核。免疫組織

3、化學檢測視網膜中COX-2、VEGF蛋白表達；RT-PCR檢測COX-2和VEGFmRNA。 第三部分：取傳代的人臍靜脈血管內皮細胞隨機分為正常組和缺氧組，免疫細胞化學染色法檢測：正常氧環(huán)境和缺氧環(huán)境培養(yǎng)24h細胞，VEGF、HIF-1α、COX-2、NF-КB的表達。MTT比色法測定細胞增殖率。用Western-blot和RT-PCR測定不同缺氧時間VEGF、HIF-1α、COX-2、NF-КB蛋白和mRNA的表達。Rofec

4、oxib干預：量-效關系組，Rofecoxib取15、30、65、100、150μmol/L5個濃度組，置于缺氧環(huán)境中培養(yǎng)24h。時-效關系組，Rofecox-ib取65μmol/L濃度，選取缺氧6、12、24、48h4個時間點觀察。用Western-blot和RT-PCR測定VEGF、HIF-1α、COX-2、NF-КB蛋白和mRNA的表達。PGE2干預：取Rofecoxib濃度為65μmol/L細胞，分別加PGE2濃度為0.1、1、

5、10μmol/L后置于缺氧環(huán)境中培養(yǎng)24h。用Western-blot和RT-PCR測定VEGF、HIF-1α、NF-КB蛋白和mRNA的表達。 結論：在視網膜新生血管形成中存在COX-2、VEGF的高表達，且兩者表達呈顯著正相關。環(huán)氧合酶-2抑制劑rofecoxib可明顯抑制小鼠視網膜新生血管形成。血管內皮細胞缺氧時，HIF-1α主要是在基因水平上誘導VEGF表達上調。NF-КB在基因水平調控COX-2、VEGF的表達。COX