1、腦缺血是當(dāng)今社會主要疾病之一，缺血誘導(dǎo)的某些關(guān)鍵酶活性的改變參與了缺血性腦損傷的形成。因此闡明其發(fā)生，發(fā)展，轉(zhuǎn)歸的病理生理學(xué)分子機制越來越受到重視。本文采用S-D大鼠的四動脈結(jié)扎全腦缺血模型，并利用亞硒酸鈉，一種抗氧化劑和K252a，一種MLK的特異性抑制劑，來分別闡明腦缺血復(fù)灌早期與氧化應(yīng)激的關(guān)系和JNK介導(dǎo)的腦缺血性神經(jīng)元凋亡的下游信號通路。 1.在大鼠海馬全腦缺血／復(fù)灌早期亞硒酸鈉通過激活P13K／AKT通路抑制ASK1／

2、JNK級聯(lián)反應(yīng) 神經(jīng)元的凋亡或存活取決于細(xì)胞內(nèi)凋亡信號通路和抗凋亡信號通路之間的平衡。在這種平衡中凋亡信號通路ASK1／JNK信號級聯(lián)反應(yīng)和抗凋亡PI3K／AKT信號通路起了重要的作用。大量的文獻報道，ASK1／JNK信號級聯(lián)反應(yīng)和P13K／AKT信號通路之間存在著密切的聯(lián)系。ASK1-Ser83是AKT的磷酸化位點，而ASK1-Thr845的磷酸化與ASK1激酶的活性有關(guān)。ASK1-Ser83磷酸化的增強可以使ASK1-Thr

3、845的磷酸化降低，從而引起ASK1激酶活性的減弱。我們實驗室早期的實驗結(jié)果表明在全腦缺血復(fù)灌早期ASK1／JNK信號級聯(lián)反應(yīng)與氧化應(yīng)激有關(guān)。在本實驗中，我們在缺血前連續(xù)7天尾靜脈注射亞硒酸鈉，一種抗氧化劑，來檢測在全腦缺血復(fù)灌早期ASK1／JNK信號級聯(lián)反應(yīng)和PI3K／AKT信號通路與氧化應(yīng)激的關(guān)系。結(jié)果表明，在全腦缺血復(fù)灌30 min，亞硒酸鈉可以明顯增強AKT和ASK1-Ser83的磷酸化，而ASK卜Thr845、MKK4、JNK

4、l／2的磷酸化被明顯抑制。同時，我們聯(lián)合使用LY294002，一種PI3K的特異性抑制劑，發(fā)現(xiàn)LY294002和亞硒酸鈉聯(lián)合用藥可以逆轉(zhuǎn)上述現(xiàn)象的發(fā)生，說明亞硒酸鈉的作用是PI3K所依賴的。結(jié)果表明，在腦缺血復(fù)灌早期，抗氧化劑亞硒酸鈉可以通過P13K／AKT信號通路的激活抑制ASK1／JNK信號級聯(lián)反應(yīng)從而起到保護神經(jīng)元的作用。 2.K252a在大鼠海馬全腦缺血／再灌介導(dǎo)的神經(jīng)元損傷中對JNK下游信號通路的影響 采用S-

5、D大鼠四動脈結(jié)扎全腦缺血模型，于缺血前20 min腦室注射K252a，用免疫沉淀、免疫印跡以及免疫組化的方法研究蛋白間的相互作用及蛋白激酶的活性變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在海馬的CAl 區(qū)，K252a可以明顯抑制腦缺血介導(dǎo)的JNK核底物c-jun的磷酸化和Fasl蛋白的表達(dá)，以及Fasl和Fas結(jié)合的增高，并進一步抑制凋亡信號調(diào)節(jié)激酶-1(ASK1)的磷酸化；另一方面，通過抑制JNK非核底物Bcl-2和14-3-3的磷酸化，阻止了Bax從Bcl-

6、2／Bax或14-3-3／Bax二聚體上的解離，從而最終抑制了腦缺血介導(dǎo)的Bax的線粒體轉(zhuǎn)位和cyto-c的胞漿釋放?？傊?，以上結(jié)果表明，激活的JNK通過磷酸化其核底物c-jun增加了AP-1的轉(zhuǎn)錄活性，并促進凋亡蛋白Fasl的表達(dá)，F(xiàn)asl結(jié)合其受體從而啟動Fas介導(dǎo)的凋亡信號通路，并進一步激活A(yù)SKl的磷酸化；另一方面，激活的JNK通過磷酸化其非核底物Bcl-2和14-3-3，促進Bax從Bcl-2／Bax或14-3-3／Bax二聚