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1、第一部分缺血訓(xùn)練促進(jìn)血管新生的遠(yuǎn)隔作用 目的:探討骨骼肌缺血訓(xùn)練促進(jìn)缺血心肌和骨骼肌血管新生的遠(yuǎn)隔作用。 方法:1.對(duì)冠狀動(dòng)脈缺血的影響:取健康成年新西蘭兔,冠狀動(dòng)脈左室支安置氣囊梗阻器,隨機(jī)分為遠(yuǎn)隔缺血訓(xùn)練組(RIT)、單純心肌缺血組(MI)、假手術(shù)組(Sham)。RIT和MI組給予4周間斷性心肌缺血刺激,建立可控性心肌缺血模型。RIT組同時(shí)應(yīng)用止血帶環(huán)扎雙下肢,給予每日4次,每次10分鐘骨骼肌缺血訓(xùn)練。2.對(duì)股動(dòng)脈缺
2、血的影響:健康成年新西蘭兔,左股動(dòng)脈安置氣囊梗阻器,隨機(jī)分為單側(cè)遠(yuǎn)隔缺血訓(xùn)練組(uRIT)、下肢缺血組(LI)。兩組均給予間斷性左下肢缺血刺激,建立可控性下肢缺血模型。uRIT組同時(shí)應(yīng)用止血帶環(huán)扎右下肢,給予右側(cè)骨骼肌缺血訓(xùn)練。刺激4周后,股動(dòng)脈缺血組做左下肢DSA檢測(cè)。之后分別取各組缺血區(qū)心肌(冠脈缺血實(shí)驗(yàn))和左側(cè)內(nèi)收肌(股動(dòng)脈缺血實(shí)驗(yàn))觀察形態(tài)學(xué)改變;微球技術(shù)檢測(cè)缺血區(qū)冠狀動(dòng)脈和股動(dòng)脈循環(huán)血流量變化;Ⅷ因子免疫組化判斷毛細(xì)血管密度;
3、Western blot方法檢測(cè)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)。 結(jié)果:與MI組相比,RIT組缺血心肌血流量,毛細(xì)血管密度以及VEGF分別增加35%,49%和28%(p<0.01);局部血流量,毛細(xì)血管密度的增加與VEGF的變化呈正相關(guān)(r=0.74,0.67,p<0.01);心肌缺血組側(cè)支血流量明顯大于Sham組(p<0.01)。DSA檢測(cè)可見(jiàn),兩組比較,uRIT組股動(dòng)脈缺血區(qū)側(cè)支血管生成顯著;uRIT組血流量明顯增加。
4、 結(jié)論:遠(yuǎn)隔缺血訓(xùn)練促進(jìn)缺血心肌與骨骼肌局部血流量增加和側(cè)支循環(huán)生成。 第二部分遠(yuǎn)隔缺血訓(xùn)練促進(jìn)血管新生的蛋白質(zhì)組學(xué)研究 目的:探索遠(yuǎn)隔缺血訓(xùn)練促進(jìn)血管新生的缺血心肌差異蛋白表達(dá),為遠(yuǎn)隔作用提供蛋白質(zhì)組學(xué)證據(jù)和分子生物學(xué)基礎(chǔ)。 方法:健康成年新西蘭兔15只,冠狀動(dòng)脈左室支安置氣囊梗阻器,隨機(jī)分為遠(yuǎn)隔缺血訓(xùn)練組(RIT)、單純心肌缺血組(MI)、假手術(shù)組(Sham),每組5只。RIT和MI組給予4周可控性心肌缺血刺
5、激,RIT組同時(shí)給予遠(yuǎn)隔缺血訓(xùn)練。應(yīng)用雙向凝膠電泳分離三組缺血心肌細(xì)胞蛋白質(zhì),經(jīng)圖像分析發(fā)現(xiàn)差異點(diǎn)后,運(yùn)用質(zhì)譜分析技術(shù)鑒定差異蛋白質(zhì)。 結(jié)果:與MI相比,圖像分析發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)隔缺血訓(xùn)練后,RIT組差異表達(dá)的蛋白點(diǎn)共38個(gè),其中5個(gè)差異點(diǎn)同時(shí)出現(xiàn)在MI與Sham的比較中。應(yīng)用質(zhì)譜分析鑒定出其中的33個(gè)蛋白點(diǎn),數(shù)據(jù)庫(kù)查詢后最終確定蛋白質(zhì)22種,按照功能分別屬于以下四類:(i)與線粒體和能量代謝相關(guān)蛋白(13種);(ii)細(xì)胞骨架蛋白(2種
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