1、本文的主要工作： 一、L-選擇蛋白抗體阻抑小鼠淋巴瘤P388D1細胞經淋巴道轉移的潛能 L-選擇蛋白參與腫瘤細胞的轉移。天然淋巴細胞向末梢淋巴結歸巢需要L-選擇蛋白的參與。本文擬探討巨噬細胞樣淋巴瘤細胞株P388D1L-選擇蛋白參與其向淋巴道轉移的作用，采用了流式細胞技術、RT-PCR及免疫熒光技術分析P388D1細胞L-選擇蛋白的表達。進而通過體外淋巴結黏附實驗、歸巢實驗及整體實驗分析L-選擇蛋白是否參與淋巴道轉移，結

2、果表明： 1.流式細胞技術和RT-PCR檢測均證明P388D1細胞表達L-選擇蛋白。免疫熒光分析結果顯示L-選擇蛋白存在與P388D1細胞膜上。 2.淋巴結體外黏附實驗結果：P388D1細胞能夠容易地黏附到淋巴結上，其黏附位置為淋巴竇和邊緣竇。用MEL-14孵育P388D1細胞后的數據顯示：P388D1細胞向淋巴竇和邊緣竇上黏附可以被MEL-14阻斷。 3.擬闡明MEL-14在抑制P388D1細胞淋巴道轉移的潛能

3、，作者等采用歸巢實驗觀察結果。將P388D1用CFSE標記后注射到小鼠足墊，分析P388D1細胞向淋巴結內的轉移。 4.擬探討MEL-14抑制P388D1細胞向淋巴結轉移的長期作用，作者等采用了整體實驗觀察其抑制轉移情況。 二、SiRNA轉染沉寂小鼠淋巴瘤P388D1細胞L-選擇蛋白表達及其經淋巴道轉移的潛能 RNA干擾是基因功能、基因治療、藥物篩選、抗病毒及抗腫瘤等研究的有效工具。 1.流式細胞技術、RT

4、-PCR檢測和免疫熒光分析均證明轉染L-選擇蛋白siRNA的P388D1細胞表面表達的L-選擇蛋白被阻抑，說明L-選擇蛋白siRNA具有將目的基因沉默的功能。 2.體外黏附實驗表明經L-選擇蛋白siRNA、對照siRNA轉染后的P388D1細胞亦能黏附到淋巴結上，其黏附位置易為淋巴竇和邊緣竇上。 3.作者等通過歸巢實驗觀察L-選擇蛋白siRNA沉寂L-選擇蛋白的表達后的P388D1細胞向淋巴結轉移情況。 4.作者

5、等采用了整體實驗觀察L-選擇蛋白基因沉默的P388D1細胞向淋巴結的轉移。 三、肝素阻抑小鼠淋巴瘤P388D1細胞經淋巴道轉移的潛能 本文擬進一步探討巨噬細胞樣淋巴瘤細胞株P388D1L-選擇蛋白參與淋巴道轉移的作用，將肝素與P388D1細胞共孵育，通過體外淋巴結黏附實驗、歸巢實驗及整體實驗分析L-選擇蛋白參與淋巴道轉移。結果表明： 1.體外黏附試驗結果表明：P388D1細胞在淋巴竇和邊緣竇上黏附可以被肝素所抑制。

6、 2.歸巢實驗結果表明：用CFSE標記與肝素共孵育的P388D1細胞后注射到小鼠足墊，在12小時后轉移到淋巴結的P388D1細胞數明顯減少，與對照組相比有顯著差異。 3.整體實驗結果表明：肝素能顯著降低P388D1細胞向淋巴結轉移。 上述結果提示：肝素可能通過抑制了L-選擇蛋白與其天然配體結合，顯著降低P388D1細胞向淋巴結轉移。P388D1細胞向淋巴結的轉移可能與L-選擇蛋白的表達相關。 盡管最近有實

7、驗表明L-選擇蛋白參與腫瘤的轉移，但L-選擇蛋白在巨噬細胞樣淋巴瘤淋巴道轉移中的作用未見報道，且不同的淋巴瘤細胞淋巴道轉移機制各不相同。本實驗采用MEL-14阻斷巨噬細胞樣淋巴瘤P388D1細胞L-選擇蛋白的表達；將L-選擇蛋白siRNA轉染巨噬細胞樣淋巴瘤P388D1細胞使L-選擇蛋白的表達沉默；使肝素抑制巨噬淋巴細胞瘤P388D1細胞L-選擇蛋白的天然配體結合探討L-選擇蛋白在淋巴道轉移中的作用。結果表明L-選擇蛋白參與巨噬細胞樣淋