1、目的：分析Grb2 shRNA轉(zhuǎn)染對(duì)腸癌細(xì)胞HT29信號(hào)通路的影響，探討針對(duì)Grb2的抑制應(yīng)用于腸癌治療的可行性。
　　方法：應(yīng)用shRNA慢病毒質(zhì)粒系統(tǒng)，將Grb2 shRNA轉(zhuǎn)染至293T細(xì)胞，獲得Grb2 shRNA慢病毒顆粒，并感染腸癌HT29細(xì)胞。MTT法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制情況，利用RT-PCR檢測(cè)Grb2 mRNA表達(dá)，Western Blot檢測(cè)Grb2、P42/44 ERK、磷酸化P42/44 ERK、Akt、磷酸化

2、Akt（P-Akt）和STAT5等信號(hào)通路分子表達(dá)的改變。
　　結(jié)果：Grb2shRNA慢病毒感染腸癌HT29細(xì)胞后，獲得5株感染shRNA慢病毒顆粒的腸癌HT29細(xì)胞株為實(shí)驗(yàn)組（即感染Grb2 shRNA的細(xì)胞HT29/shGrb2-69、HT29/shGrb2-70、 HT29/shGrb2-71、HT29/shGrb2-72、HT29/shGrb2-73），以eGFP shRNA慢病毒感染腸癌HT29細(xì)胞為陰性對(duì)照組。感染7

3、2小時(shí)后，經(jīng)RT-PCR、Western Blot檢測(cè)后，發(fā)現(xiàn)HT29/shGrb2-69、HT29/shGrb2-73細(xì)胞中Grb2的抑制效果最好。與空白對(duì)照、陰性對(duì)照比較，HT29/shGrb2-69、HT29/shGrb2-73細(xì)胞在感染后24小時(shí)OD值分別為0.176±0.045，0.186±0.013（P<0.001）,48小時(shí)為0.347±0.048、0.382±0.041(P<0.001),72小時(shí)為0.934±0.038