1、目的:探索黃芪甲苷對3，4苯并芘(Benzo(a) pyrene，BaP)介導的內(nèi)皮祖細胞(Endothelial progenitor cells)損傷是否有保護作用，并且研究其可能的機制，為以后的藥物干預(yù)提供思路。
　　方法:
　?。ㄒ唬┨剿鼽S芪甲苷對EPCs的功能的影響:采集健康順產(chǎn)產(chǎn)婦(37-39w)臍帶血，用密度梯度離心法以及貼壁培養(yǎng)法分離培養(yǎng)內(nèi)皮祖細胞(EPCs)。然后用Dil標記的乙酰低密度脂蛋白(Dil-ac

2、-LDL)攝取實驗，F(xiàn)ITC標記的荊豆凝集素(FITC-UEA-1 lectin)結(jié)合實驗以及Ⅷ因子相關(guān)抗原的免疫細胞化學檢測來鑒定所培養(yǎng)的細胞是否為內(nèi)皮祖細胞。用胰酶消化收集第四代內(nèi)皮祖細胞，并且進行隨機分組:1.培養(yǎng)基組(Control組):沒有任何干預(yù);2.溶劑組（DMSO組）:添加培養(yǎng)基及DMSO溶劑，DMSO濃度為1mL·L-1;3.損傷組（BaP組）:添加培養(yǎng)基及用DMSO溶解的BaP，BaP濃度為20μ M;4.黃芪甲苷各

3、組:黃芪甲苷的濃度分別為2，10 and50μ g/mL，并且每組都添加濃度為20μM的BaP，在加入BaP之前先用不同濃度的黃芪甲苷預(yù)處理2h，再繼續(xù)培養(yǎng)24h。最后用細胞計數(shù)試劑盒（CCK-8）檢測內(nèi)皮祖細胞增殖能力，用Transwel小室檢測內(nèi)皮祖細胞遷移能力，用細胞粘附能力檢測內(nèi)皮祖細胞粘附能力。
　?。ǘ┛赡艿臋C制研究:用胰酶消化收集第四代內(nèi)皮祖細胞，并進行隨機分組:1.培養(yǎng)基組(Control組):沒有任何干預(yù);2.

4、溶劑組（DMSO組）:添加培養(yǎng)基及DMSO溶劑，DMSO濃度為1mL· L-1;3.損傷組(BaP組):添加培養(yǎng)基及用DMSO溶解的BaP，BaP濃度為20μM;4.黃芪甲苷各組:黃芪甲苷的濃度分別為2，10and50μ g/mL，并且每組都添加濃度為20μM的BaP，在加入BaP之前先用不同濃度的黃芪甲苷預(yù)處理2h，再繼續(xù)培養(yǎng)24h。最后采集細胞培養(yǎng)上清液，用SOD試劑盒和MDA試劑盒檢測各組細胞上清液的SOD及MDA表達含量。用RO

5、S試劑盒對各組內(nèi)皮祖細胞經(jīng)行免疫熒光染色，并且分析各組EPCs的ROS表達量。最后用免疫印跡法檢測各組EPCs細胞核中NF-κ B的含量。
　　結(jié)果:
　?。ㄒ唬〦PCs的培養(yǎng)及鑒定:通過密度梯度離心法分離培養(yǎng)的內(nèi)皮祖細胞，集落呈現(xiàn)典型的鋪路石樣結(jié)構(gòu)。經(jīng)Dil標記的乙酰低密度脂蛋白（Dil-ac-LDL）攝取和FITC標記的荊豆凝集素（FITC-UEA-1 lectin）結(jié)合雙染實驗以及Ⅷ因子相關(guān)抗原的免疫細胞化學檢測鑒定，

6、結(jié)果顯示培養(yǎng)細胞表達特異性抗原，為內(nèi)皮祖細胞。
　?。ǘ┹^培養(yǎng)基組相比，BaP明顯損害了的EPCs的增殖、粘附、遷移能力(P＜0.01)， ROS及MDA表達含量明顯升高(P＜0.01)，SOD含量明顯減少(P＜0.01)，NF-κ B的表達量明顯上升(P＜0.05)。相反，較BaP組相比，各組黃芪甲苷組的EPCs的增殖、粘附、遷移能力得到大幅度改善(P＜0.05)， SOS及MDA表達含量明顯降低(P＜0.05)，SOD含量明