1、目的子宮內(nèi)膜癌發(fā)病率呈逐年增高趨勢，嚴重影響女性生命健康，因此探討子宮內(nèi)膜癌治療的新措施具有重要的意義。目前大量研究表明在子宮內(nèi)膜癌腫瘤內(nèi)VEGF-A、Ang-2等血管生成因子表達升高，且與腫瘤的生長及轉移等有密切的關系。本研究構建靶向VEGF-A和Ang-2的shRNA，采用分子生物學技術驗證其在子宮內(nèi)膜癌細胞株Ishikawa細胞中的治療有效性，并建立子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細胞裸鼠皮下移植瘤模型，進一步證實了聯(lián)合應用靶向VEGF

2、-A和Ang-2的shRNA顯著抑制子宮內(nèi)膜癌移植瘤的生長，為子宮內(nèi)膜癌的靶向抗血管生成治療提供依據(jù)。
　　方法體外培養(yǎng)子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細胞株，利用脂質體介導shRNA VEGF-A和shRNA Ang-2轉染入細胞，以無義隨機序列構建的陰性質粒組作為對照，實時定量PCR技術檢測VEGF-A、Ang-2 mRNA表達水平的變化；Western blot技術檢測VEGF-A、Ang-2蛋白質表達的變化；MTT法檢測VEGF

3、-A、Ang-2下調后對細胞增殖能力的影響；Annexin V-PE雙染后流式細胞儀檢測細胞的凋亡情況；Transwell腫瘤侵襲實驗檢測細胞侵襲能力的變化。建立子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細胞裸鼠皮下移植瘤模型，給予shRNAVEGF-A聯(lián)合shRNA Ang-2治療，Western blot技術檢測瘤體中VEGF-A、Ang-2蛋白質表達的變化，免疫組化檢測微血管密度，各組織器官HE染色觀察毒副作用及腫瘤轉移情況。
　　結果在體

4、外實驗中，與空白對照組和陰性質粒組相比，VEGF-A干擾組、Ang-2干擾組、聯(lián)合干擾組都能從mRNA水平、蛋白水平下調Ishikawa細胞中靶基因的表達。各干擾組都能有效地抑制Ishikawa細胞生長增殖能力和侵襲能力，其中聯(lián)合干擾組抑制效果更顯著，各組對細胞周期和凋亡無明顯影響。
　　在體內(nèi)試驗中，與空白對照組和陰性質粒組相比，VEGF-A干擾組、Ang-2干擾組、聯(lián)合干擾組下調裸鼠皮下移植瘤內(nèi)靶基因的蛋白表達，各干擾組移植瘤