1、目的：采用UMR-106大鼠骨肉瘤細胞和Wistar大鼠為研究對象，從細胞到整體動物水平，全面分析氟中毒狀態(tài)下，Gs與 Gi調(diào)控的Gs-AC-cAMP-PKA信號轉導通路各因子的表達變化，為進一步明確Gs-AC-cAMP-PKA信號通路在氟骨癥中的作用奠定基礎。
　　方法：1.氟化鈉對UMR-106細胞的影響及其與Gs/Gi-AC-cAMP-PKA信號通路表達的關系。（1）0、50、100、500、1000、5000、10000、

2、20000、40000、80000?mol/L NaF作用UMR-106細胞24h、48h，采用CCK-8法檢測細胞的存活情況，明確后續(xù)實驗作用濃度及時間。（2）0、1000、2000、4000?mol/L NaF作用UMR-106細胞24h后，磷酸苯二鈉法檢測ALP活性，流式細胞術檢測細胞周期及凋亡情況，qRT-PCR技術檢測細胞內(nèi)BGP、Gs、Gi、AC、PKA mRNA表達水平。2.氟化鈉對Wistar大鼠骨組織中Gs/Gi-AC

3、-cAMP-PKA信號轉導通路表達影響。48只斷乳2周 Wistar大鼠按體重隨機分為4組，分別為對照組（自來水）和低劑量組（50mg/L NaF）、中劑量組（150 mg/L NaF）、高劑量組（250 mg/L NaF），每組12只，雌雄各半。采用自由飲水方式染毒，連續(xù)染毒6個月。檢測大鼠尿氟、骨氟、牙氟及血清氟濃度及氟斑牙發(fā)生率；比色法檢測大鼠骨組織中抑制羥自由基能力、CAT、GSH-Px、SOD的活力及ELISA方法檢測8-OH

4、dG、PCO、MDA、Gs、Gi、AC、cAMP、PKA的濃度。
　　結果：1.氟化鈉對 UMR-106細胞的影響及其與Gs/Gi-AC-cAMP-PKA信號通路表達的關系（1）CCK-8檢測結果：作用24h時，1000~80000μmol/L NaF組UMR-106細胞存活率較對照組低（P<0.05）；作用48h時，50~80000μmol/LNaF組UMR-106細胞存活率較對照組低（P<0.05）。確定后續(xù)實驗作用濃度為0、

5、1000、2000、4000?mol/L，作用時間為24h。（2）ALP及BGP檢測結果：各NaF處理組在UMR-106細胞的培養(yǎng)液及細胞中的ALP活力均較對照組高（P<0.05）；2000、4000?mol/L NaF組BGP mRNA相對表達量較對照組高（P<0.05）。（3）細胞周期及凋亡檢測結果：1000、4000?mol/L NaF組細胞數(shù)量在G0/G1期所占比例較對照組低（P<0.05），2000?mol/L NaF組細胞數(shù)

6、量在G0/G1期所占比例高于其余各組（P<0.05）；2000?mol/L NaF組細胞數(shù)量在S期所占比例較其余各組低（P<0.05）；4000?mol/L NaF組細胞數(shù)量在G2/M期所占比例較其余各組低（P<0.05）；1000及4000?mol/L NaF組PI較對照組高，2000?mol/L NaF組較對照低（P<0.05）。1000?mol/LNaF組凋亡率較對照組低，2000、4000?mol/L NaF組凋亡率較對照組高（

7、P<0.05）。（4）Gs、Gi、AC、PKA mRNA表達檢測結果：2000?mol/L NaF組PKA、4000?mol/L NaF組Gs及PKA的mRNA相對表達量較對照組高（P<0.05）；各實驗組Gi與AC基因mRNA相對表達量差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。2.氟化鈉對 wistar大鼠骨組織中Gs/Gi-AC-cAMP-PKA信號轉導通路表達影響。（1）氟中毒動物模型建立指標檢測結果：對照組無氟斑牙發(fā)生，各劑量NaF染毒

8、組氟斑牙檢出率為100％；各劑量NaF染毒組大鼠尿氟、牙氟、骨氟、血清氟濃度均較對照組高（P<0.05）。（2）大鼠骨組織氧化損傷指標檢測結果：中劑量組大鼠骨組SOD及中、高劑量組CAT、抑制羥自由基能力均較對照組低（P<0.05）；低劑量大鼠組骨組織 GSH-Px高于其余組（P<0.05）；各劑量組大鼠骨組織 PCO高于對照組（P<0.05）。各組大鼠骨組織8-OHdG與MDA之間差異無統(tǒng)計學意義。（3）大鼠骨組織Gs、Gi、AC、c

9、AMP及PKA含量在各NaF染毒組間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　結論：1.氟化鈉可促進UMR-106細胞ALP活性、增加BGP mRNA表達。2.高濃度氟化鈉可影響UMR-106細胞周期，延長G0/G1或S期，抑制細胞增殖，誘導細胞凋亡。3.高濃度氟化鈉可增加UMR-106細胞Gs、PKA mRNA表達。4.成功建立了慢性氟中毒大鼠模型。5.150、250mg/L NaF可能致大鼠骨組織氧化損傷。6.采用ELISA方法