1、黃瓜(Cumcumis sativus L.)是一種世界性的重要蔬菜，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和國(guó)民經(jīng)濟(jì)中占有極其重要的地位。但是在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中特別是設(shè)施栽培中，黃瓜經(jīng)常受到持續(xù)陰雨天氣或霧霾天氣低溫、弱光、短日照等因素的影響授粉受精不良，造成“化瓜”，嚴(yán)重影響黃瓜栽培的高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)和效益，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。
　　近些年來(lái)，基因工程飛速發(fā)展為我們提供了一個(gè)新型、快速的育種平臺(tái)。由于黃瓜的遺傳基礎(chǔ)狹窄、傳統(tǒng)育種年限較長(zhǎng)、效率低等因素，利用常規(guī)育種較

2、難獲得突破性進(jìn)展，因此利用植物基因工程手段對(duì)其進(jìn)行遺傳改良是一種有效的途徑。高效、穩(wěn)定的離體再生和遺傳轉(zhuǎn)化體系是黃瓜轉(zhuǎn)基因育種的基礎(chǔ)。本試驗(yàn)以“津優(yōu)1號(hào)”黃瓜子葉、子葉節(jié)作外植體，研究了外植體類型和不同激素組合和激素濃度對(duì)黃瓜離體分化的影響，建立了高頻、穩(wěn)定的黃瓜離體再生體系；同時(shí)研究了不同的Kan濃度、侵染時(shí)間、預(yù)培養(yǎng)、共培養(yǎng)時(shí)間和AS濃度對(duì)黃瓜遺傳轉(zhuǎn)化的影響，優(yōu)化和建立了高效遺傳轉(zhuǎn)化體系；在此基礎(chǔ)之上，通過(guò)基因工程技術(shù)，將擴(kuò)張蛋白基

3、因 CsEXP10導(dǎo)入黃瓜，獲得轉(zhuǎn)基因植株，為實(shí)現(xiàn)黃瓜種質(zhì)創(chuàng)新和分子改良提供理論依據(jù)。
　　主要研究結(jié)果如下：
　　1.以“津優(yōu)1號(hào)”為試驗(yàn)材料建立了黃瓜子葉節(jié)高效再生體系。黃瓜種子溫湯浸種后流水沖洗4~5 h，在超凈工作臺(tái)上用70％酒精消毒1 min，用0.1％的升汞消毒15~20 min，最后用無(wú)菌水沖洗5~6次，將種子接種到MS基本培養(yǎng)基上；待黃瓜無(wú)菌苗生長(zhǎng)5~6 d左右兩片子葉未完全張開，切去生長(zhǎng)點(diǎn)，兩片子葉均切去上

4、半部分1/2~2/3，下胚軸縱切，保留2 mm下胚軸，置于37個(gè)子葉節(jié)芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，其中在MS+2.0 mg/L6-BA+2.0 mg/L AgNO3培養(yǎng)基上，芽分化頻率較高，為96.2％，每塊外植體再生芽數(shù)可達(dá)4.38；在MS培養(yǎng)基上生根率可達(dá)100％，40~50 d可得到完整再生植株。
　　2.在建立黃瓜子葉節(jié)再生體系的基礎(chǔ)上，從侵染時(shí)間、預(yù)培養(yǎng)時(shí)間及共培養(yǎng)時(shí)間、乙酰丁香酮(AS)濃度、生根培養(yǎng)等幾方面，建立和優(yōu)化農(nóng)桿菌介導(dǎo)

5、黃瓜遺傳轉(zhuǎn)化體系。取預(yù)培養(yǎng)2 d的子葉節(jié)，用活化的農(nóng)桿菌菌液(菌液中加100μmol/L AS)侵染15 min，在無(wú)菌吸水紙上吸干表面液體，在共培養(yǎng)基中培養(yǎng)2 d，然后置于篩選培養(yǎng)基：MS+2.0 mg/L6-BA+2.0 mg/L AgNO3+300 mg/L Cef+100 mg/L Kan進(jìn)行不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)，可獲得較高的轉(zhuǎn)化效率。
　　3.轉(zhuǎn)基因植株的分子檢測(cè)。抗性植株，經(jīng)過(guò)PCR檢測(cè)，得到了12株陽(yáng)性轉(zhuǎn)基因苗；GUS染色