TLR-,2-介導(dǎo)小鼠內(nèi)源性損傷觸發(fā)的免疫反應(yīng)的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、第一部分:小鼠Kupffer細(xì)胞、肝竇內(nèi)皮細(xì)胞分離、純化、培養(yǎng)和鑒定.目的:建立簡便、有效和穩(wěn)定的大鼠肝Kupffer細(xì)胞(Kupffercells,KC)和肝竇內(nèi)皮細(xì)胞(sinusoidal endothelial cells,SEC)分離、純化和培養(yǎng)方法.方法:采用膠原酶原位灌注消化干組織;percoll不連續(xù)密度梯度離心;選擇性貼壁純化;經(jīng)免疫組化和掃描電鏡鑒定.結(jié)果:最終獲得小鼠肝Kupffer細(xì)胞和SEC產(chǎn)量分別為2.0±0.

2、4*10<'6>/肝,1.1±0.6*106/肝;純度分別為>90％,>75％,細(xì)胞活性均大于95％.第二部分:小鼠肝內(nèi)源性損傷下TLRs在Kupfier細(xì)胞、肝竇內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá).目的:觀察在小鼠內(nèi)源性損傷模型下肝臟Kupffer細(xì)胞和肝竇內(nèi)皮細(xì)胞表面Toll樣受體(Toll Like Receptors,TLRs)蛋白及mRNA表達(dá).方法:實(shí)驗(yàn)組建立肝部分缺血/再灌注模型,對(duì)照組進(jìn)行假手術(shù),采用原位灌注消化法分離并純化Kupffer

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