RBM5基因過表達抑制A549細胞增殖及其對DHX15表達影響的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:通過建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染RBM5基因的A549細胞系，觀察RBM5基因過表達對A549細胞增殖以及DHX15表達的影響，為肺癌基因治療提供理論依據(jù)。
　　方法:
　?、賾肞CR技術從人睪丸cDNA中分兩段擴增RBM5基因的開放閱讀框(ORF)，將RBM5基因克隆至真核表達載體pcDNA3.1(+)中;
　?、趯y序驗證后的重組質(zhì)粒pcDNA3.1(+)/RBM5轉(zhuǎn)染肺腺癌細胞A549，經(jīng)G418篩選出RBM5基因過表達

2、陽性細胞株并采用Western Blot檢測對陽性細胞進行鑒定，流式細胞法檢測RBM5基因過表達對肺腺癌細胞A549細胞周期的影響;
　?、圻\用RT-PCR技術檢測RBM5基因過表達A549細胞株中剪接相關因子DHX15的表達情況。
　　結(jié)果:
　?、俪晒?gòu)建出pcDNA3.1(+)/RBM5真核表達載體，建立了穩(wěn)定轉(zhuǎn)染RBM5基因的A549細胞系并篩選出RBM5基因過表達陽性細胞株;
　?、谥亟M質(zhì)粒pcDNA3

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