1、目的:
　　調(diào)查多重耐藥銅綠假單胞菌株中可移動性遺傳元件的分布情況，并以整合子為對象深入研究，探究整合子中不同可變區(qū)啟動子Pant對耐藥基因盒和整合酶的表達以及整合頻率的影響，了解啟動子Pant在整合子介導(dǎo)的耐藥機制中的作用，從而為控制細菌廣泛耐藥和新型抗菌藥物的研發(fā)提供一定的理論基礎(chǔ)。
　　方法:
　　從臨床標本中分離并篩選出49株多重耐藥的銅綠假單胞菌，采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)分析21種可移動遺傳元件的分布情況，

2、并對可移動元件的組合形式進行分析;構(gòu)建高表達整合酶基因的重組質(zhì)粒pET-INT和同時含有無耐藥基因盒整合子和aadA2基因盒的重組質(zhì)粒pACYC-IN-AAD，通過表型篩選法測定其整合頻率;通過點突變法構(gòu)建含有不同可變區(qū)啟動子的重組質(zhì)粒，通過實時熒光定量PCR比較其aadA2基因和intI1基因的表達量。
　　結(jié)果:
　　49株多重耐藥銅綠假單胞菌菌株中，共檢出11種可移動遺傳元件相關(guān)遺傳標記基因，4個種類的可移動性遺傳元件

3、均有檢出。陽性率最高的為IS26(77.6％)，其次為intI1(67％)。于國內(nèi)首次在多重耐藥銅綠假單胞菌中檢出traF基因;本研究成功構(gòu)建了整合子剪切和捕獲耐藥基因盒的體外模型，研究發(fā)現(xiàn)，在BL21(DE3)菌株中，含有高表達整合酶的整合子對耐藥基因盒的整合能力是無高表達整合酶整合子的9.41倍;不同可變區(qū)啟動子下游基因盒中基因的轉(zhuǎn)錄水平有顯著差異，4種質(zhì)粒的aadA2基因轉(zhuǎn)錄水平從高到低依次為:MU2＞pACYC-IN-AAD＞M