1、不孕癥(Infertility)在已婚婦女中占有很高的發(fā)病率,并成為世界性的疑難病癥,不孕癥已經(jīng)不僅僅是一個(gè)獨(dú)立的疾病,而是許多婦科疾病的一種延伸。近幾年不孕癥的發(fā)生率呈顯著的上升趨勢(shì),因此對(duì)不孕癥的有效治療研究則意義重大。目前臨床不孕癥大多與社會(huì)工作壓力大,精神緊張以及起居失常、飲食不節(jié)等原因造成腎虛、肝郁或脾虛有關(guān),其中肝郁脾虛型不孕癥占之比例為最大。本課題采用吾師疏肝健脾經(jīng)驗(yàn)方,針對(duì)肝郁脾虛型不孕癥的療效做為切入點(diǎn),研究本方的療效

2、與不同配伍對(duì)芍藥苷含量的影響。
　　 第一部分：疏肝健脾方及拆方配伍對(duì)芍藥苷含量的影響研究，
　　 目的:采用HPLC法測(cè)定疏肝健脾方及拆方配伍中芍藥苷的含量。
　　 方法:
　　 采用高效液相色譜法(HPLC)建立測(cè)定疏肝健脾方、拆方配伍等不同組中芍藥苷含量的方法學(xué),即調(diào)整流動(dòng)相的配比組成,摸索測(cè)定不同組中芍藥苷含量的最佳色譜條件。并進(jìn)行色譜條件系統(tǒng)性實(shí)驗(yàn)如下。
　　 (1)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:配制系

3、列濃度的芍藥苷對(duì)照品溶液,分別進(jìn)樣檢測(cè),按含量測(cè)定方法測(cè)定峰面積,以芍藥苷的濃度為橫坐標(biāo),測(cè)定的峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
　　 (2)精密度試驗(yàn):精密量取芍藥苷對(duì)照品溶液,重復(fù)進(jìn)樣5次,在色譜條件下測(cè)定峰面積,測(cè)定實(shí)驗(yàn)的精密度。
　　 (3)重復(fù)性試驗(yàn):精密量取同一組供試品溶液,平行進(jìn)樣5次,分別測(cè)定峰面積,計(jì)算實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性。
　　 (4)穩(wěn)定性試驗(yàn):精密量取某一組供試品溶液,在24小時(shí)內(nèi)于每隔一定時(shí)間將樣

4、品注入高效液相色譜儀,分別測(cè)定其峰面積。
　　 (5)回收率試驗(yàn):采用加樣回收率測(cè)定法,取已知含量的樣品溶液,分別加入一定量的芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品,所得樣品分別進(jìn)樣,在上述色譜條件下測(cè)定峰面積,計(jì)算回收率。并在上述選擇的最佳色譜條件下測(cè)定其峰面積,用外標(biāo)法計(jì)算各組中芍藥苷的含量。以檢測(cè)白芍及白芍配伍健脾藥白術(shù)、或茯苓,或肝經(jīng)氣分藥柴胡、或肝經(jīng)血分藥當(dāng)歸對(duì)其芍藥苷含量的影響,并與疏肝健脾方中芍藥苷含量進(jìn)行比較分析。
　　 結(jié)果

5、:
　　 1：不同配伍組中芍藥苷含量的HPLC方法學(xué)的建立
　　 采用與臨床上服藥方法相一致的水提法制備待檢溶液。(1)不同組分中芍藥苷含量的HPLC測(cè)定色譜條件為:色譜柱為Diamonsic C18柱(5μm,200×4.6 mm);紫外檢測(cè)器,檢測(cè)波長(zhǎng):230nm;流動(dòng)相:甲醇-水(35:65);流速:1.0ml/min;柱溫:25℃;進(jìn)樣量:10μl;理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算,應(yīng)不低于2000。在此色譜條件下,測(cè)得

6、的芍藥苷色譜峰的保留時(shí)間約為10min,分離度大于1.5。(2)芍藥苷在0.00974～0.05846mg/ml的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,回歸方程為y=12154x+11.435(R2=0.9997,n=5)。(3)精密度測(cè)得RSD值為0.22％(n=5)(4)本方法重現(xiàn)性良好,RSD值為0.088％(n=5)。(5)穩(wěn)定性試驗(yàn)表明樣品在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定,RSD值為0.43％(n=6)。(6)芍藥苷的平均回收率為99.47％,RSD值為0

7、.52％(n=9),表明回收率較高,方法準(zhǔn)確可靠。
　　 2：測(cè)定疏肝健脾方及拆方配伍中芍藥苷的含量
　　 采用高效液相色譜法(HPLC)檢測(cè)芍藥苷的含量,結(jié)果測(cè)定得出:單味藥白芍組中芍藥苷含量為19.49 mg/g,白芍與柴胡配伍組中芍藥苷含量為28.48 mg/g,較單味藥白芍組提高46.1％;白芍與當(dāng)歸配伍組中芍藥苷含量為22.96 mg/g,較單味藥白芍組提高17.8％;白芍與白術(shù)配伍組中芍藥苷含量為23.68

8、mg/g,較單味藥白芍提高21.5％;白芍與茯苓配伍組中芍藥苷含量為17.76 mg/g,較單味藥白芍組下降8.9％,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。疏肝健脾方中芍藥苷含量為25.34 mg/g,較單味藥白芍組提高30.0％(P＜0.05)。測(cè)定結(jié)果表明白芍配伍柴胡、當(dāng)歸、白術(shù)后,其芍藥苷含量均較單味白芍組顯著提高(P＜0.05);疏肝健脾方除外,白芍與柴胡組,均較其他各組有提高,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 第二部分

9、：疏肝健脾方治療肝郁脾虛型不孕癥60例臨床療效觀察。
　　 目的:
　　 選擇肝郁脾虛型不孕癥的臨床病例60例,給予疏肝健脾方治療,采用前后自身對(duì)照的方法,觀察其療效,并探討疏肝健脾方中芍藥苷含量與臨床療效的相關(guān)性。
　　 方法:
　　 收集2008年至2009年河北省中醫(yī)院專家門診不孕癥病例,包括繼發(fā)性不孕和原發(fā)性不孕,經(jīng)辨證屬于中醫(yī)肝郁脾虛型范疇入選60例。給予疏肝健脾方治療,水煎溫服,每日2次,分別

10、于上午9～10點(diǎn)和晚上睡前半小時(shí)服,每次約200ml。以1個(gè)月經(jīng)周期為一療程,連續(xù)服藥治療3～6個(gè)周期。遵循中醫(yī)理論整體觀念,根據(jù)患者具體病癥表現(xiàn)適當(dāng)加減藥物,如側(cè)重肝郁者,加玫瑰花、薄荷、郁金等,以增強(qiáng)養(yǎng)肝散肝清肝三者并用之效;重在脾虛者,加黨參、山藥、甘松,焦三仙等,以增強(qiáng)健脾補(bǔ)土之用。觀察指標(biāo):(1)觀察臨床癥狀如煩躁易怒、情緒潑動(dòng)、時(shí)常乳房脹痛,食少納呆、大便不規(guī)律,舌質(zhì)淡紅,苔薄白或白,脈象弦或弦細(xì)。(2)觀察月經(jīng)的期、色、質(zhì)

11、、量的變化。(3)生化指標(biāo)于月經(jīng)的第2天早晨空腹抽血,檢測(cè)血清性激素六項(xiàng)水平。(4)B超監(jiān)測(cè)于月經(jīng)的第12～18天采用B超監(jiān)測(cè)方式,監(jiān)測(cè)子宮內(nèi)膜厚度與卵泡發(fā)育情況。(5)在用藥治療1個(gè)周期后對(duì)月經(jīng)周期延遲10日以上者進(jìn)行尿檢hCG,停經(jīng)5周B超檢測(cè)到胚芽和原始心管搏動(dòng),確定宮內(nèi)妊娠、活胎。
　　 結(jié)果:
　　 1：臨床癥狀在連續(xù)治療3個(gè)周期后60例患者的月經(jīng)周期規(guī)律,情緒穩(wěn)定,心情舒暢,飲食、起居規(guī)律,睡眠好;但側(cè)重肝郁

12、者,癥狀改善明顯好于脾虛為主者,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2：生化指標(biāo)治療3個(gè)周期后有55例患者血清性激素六項(xiàng)水平正常,或接近正常,雄性激素與雌性激素比例平衡協(xié)調(diào);治療6個(gè)周期后剩余5例中有4例患者血清性激素六項(xiàng)指標(biāo)正常協(xié)調(diào),1例PRL偏高。
　　 3：B超檢測(cè)治療3個(gè)周期后,52例患者B超檢測(cè)顯示子宮內(nèi)膜與卵泡發(fā)育良好,可檢測(cè)到優(yōu)勢(shì)卵泡(卵泡直徑≥18mm),且子宮內(nèi)膜與卵泡的發(fā)育大小呈周期性變化;治療6個(gè)周期后,除1例

13、患者因一側(cè)輸卵管不通,每間隔一個(gè)月方能檢測(cè)到優(yōu)勢(shì)卵泡(一側(cè)排卵):1例患者治療6個(gè)周期后,仍未檢測(cè)到優(yōu)勢(shì)卵泡外,其余6例B超檢測(cè),顯示可檢測(cè)到優(yōu)勢(shì)卵泡。
　　 4：受孕情況連續(xù)服用疏肝健脾方治療在第2個(gè)周期尿檢HCG為陽性、B超顯示宮內(nèi)早孕者有6例;連續(xù)用藥在第3～4個(gè)周期受孕者有29例;連續(xù)用藥在第5～6個(gè)周期受孕者23例,總有效率為96％,2例激素水平趨于正常,但未受孕。
　　 結(jié)論:
　　 1：應(yīng)用高效液相

14、色譜(HPLC)法所建立的測(cè)定不同配伍中芍藥苷含量的方法,分離度、精密度和重現(xiàn)性良好,能夠用于含有芍藥苷成分的中藥配伍及復(fù)方的含量測(cè)定。
　　 2：白芍配伍柴胡、當(dāng)歸、白術(shù)后,能提疏肝健脾方中芍藥苷的含量,且明顯高于單味藥白芍組。推測(cè)芍藥苷可能是疏肝健脾方治療肝郁脾虛型不孕癥的主要有效成分之一。
　　 3：疏肝健脾方對(duì)情志有一定的調(diào)節(jié)作用,且能很好的改善患者的月經(jīng)周期、經(jīng)色、經(jīng)質(zhì)、經(jīng)量,以及與其相關(guān)的飲食、睡眠、排便等服