創(chuàng)新藥物丹參素鈉的體內分析及其代謝研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、藥物代謝動力學旨在通過測定生物樣本中的藥物或者代謝產物的濃度,定量描述藥物進入體內以后的吸收、分布、代謝、排泄過程,進而闡明藥物的藥效或者毒性,為新藥研究的代謝篩選和臨床用藥的療效評價提供重要依據。丹參素為從唇形科植物丹參Salvia miltiorrhiza Bunge的干燥根中提取出的單體化合物,具有明顯的藥理活性。作為丹參的主要活性成分之一,有必要對丹參素進行藥代動力學研究,探討其體內過程。本文建立的LC-MS/MS法測定血漿、尿

2、液、膽汁等多種生物樣本中的丹參素鈉濃度,滿足臨床前藥代動力學研究對高靈敏度、高選擇性檢測的技術要求。此外,本文還進行了丹參素鈉的體內、體外代謝研究,初步建立了體外代謝篩選研究平臺,為進一步開展臨床用藥及劑型開發(fā)提供參考依據。
   一、生物樣品中丹參素鈉定量分析方法的建立與確證
   在臨床前藥代動力學研究中,定量分析方法的建立與確證占有舉足輕重的地位,只有建立可靠、專一、靈敏、快速的生物樣品分析方法,才能保證藥代動力學

3、研究的順利進行。本文采用高靈敏度的LC-MS/MS方法檢測生物樣品中丹參素鈉的濃度,生物樣品以鹽酸酸化后用乙酸乙酯提取其中的丹參素鈉。色譜分析采用迪馬Diamonsil C-18,5μm,200×4.6mm,柱溫25℃;流動相組成為甲醇:水=80:20(含0.01‰甲酸),采用等梯度洗脫方式,流速0.80mL/min,3:2分流入質譜的流速為0.32mL/min,進樣量20μl。質譜檢測采用ESI離子源、負離子檢測模式,選擇MRM工作方

4、式進行質譜分析。經完整的方法學確證,所有測定生物樣品的線性、準確度、精密度、回收率、基質效應、稀釋效應、穩(wěn)定性等均滿足生物樣品的定量分析要求。該方法成功用于SD大鼠的藥代動力學研究及尿液和膽汁的排泄研究。
   二、丹參素鈉在SD大鼠體內的臨床前藥代動力學研究
   本試驗設計SD大鼠單劑量尾靜脈注射給藥丹參素鈉15mg/kg、30mg/kg、60mg/kg三個劑量組進行藥代動力學研究。采用LC-MS/MS測定方法分別測

5、定了給藥后不同時間的體內丹參素鈉血藥濃度。按血漿樣品預處理操作,測得數據代入相應樣品隨行標準曲線中求得含量。經非房室模型法估算藥代動力學參數。結果表明,大鼠單劑量靜注給藥丹參素鈉15mg/kg、30mg/kg、60mg/kg三個劑量組藥代動力學藥時曲線末端相消除半衰期(t1/2)分別為2.73h、2.37h、1.95h;AUC0~∞分別為15.29μg·h/mL、34.58μg·h/mL和58.49μg·h/mL,AUC與給藥劑量基本呈

6、正相關,相關系數r2為0.9836。
   SD大鼠單劑量尾靜脈注射給藥丹參素鈉30mg/kg后,于給藥后收集0~96h的尿液,按尿液樣品預處理操作,測得數據代入相應樣品隨行標準曲線中求得含量。結果表明,丹參素鈉在SD大鼠體內主要經尿液排泄,96h藥物累積排泄量為46.99%。SD大鼠單劑量尾靜脈注射給藥丹參素鈉30mg/kg后,于給藥后0~24h取其膽汁,按膽汁樣品預處理操作,測得數據代入膽汁樣品隨行標準曲線中求得含量。結果表

7、明,丹參素鈉在SD大鼠體內經膽汁排泄量少,24h內膽汁累積排泄量為給藥劑量的0.82%。綜上所述,丹參素鈉在SD大鼠體內主要以原型藥的形式直接由尿排出體外。
   三、丹參素鈉體內外代謝的初步研究
   丹參素鈉給藥后大鼠膽汁和尿液樣品的分析結果顯示,其進入體內后,主要發(fā)生Ⅱ相代謝反應,主要代謝物為:甲基化丹參素[M-H+14]-、硫酸酯結合物[M-H+80]-、甲基化硫酸酯結合物[M-H+94]-、經尿液排出體外;膽汁

8、中主要存在著甲基化丹參素。丹參素鈉經在體腸灌流、原位肝灌流等實驗后,主要產生甲基化代謝產物,說明這些器官組織中存在著參與其甲基化反應的酶。經過體外肝勻漿、肝微粒體、腎勻漿、腎微粒體溫孵后,主要代謝產物為甲基化丹參素。丹參素鈉在大鼠肝微粒體酶中代謝的酶動力學結果顯示,它在大鼠肝微粒體酶中代謝的Vmax為185.19ng/(mL·min·mg)蛋白,Km為98940.74ng/L,即5.0×10-4mol/L,內在代謝清除率Clint為1.

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