1、目的：利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)和大鼠急性脊髓損傷(acute spinalcord injury,ASCI)模型,比較川芎嗪治療與生理鹽水治療后脊髓蛋白質(zhì)組表達(dá)譜的差異,鑒定川芎嗪作用相關(guān)的差異蛋白質(zhì)。并對(duì)差異蛋白質(zhì)進(jìn)行初步功能分析,從蛋白質(zhì)分子水平揭示川芎嗪治療大鼠急性脊髓損傷的機(jī)制。
　　 方法：正常成年SD大鼠12只,采用改良ALLEN氏重物打擊法制作急性脊髓中度損傷模型12個(gè)。隨機(jī)分成兩組:(1)生理鹽水治療組(NS組,N組)

2、(n=6)；(2)川芎嗪治療組(TMP組,T組)(n=6)。兩組大鼠按術(shù)后動(dòng)物存活的時(shí)間再各分為3天組和7天組兩個(gè)亞組,每亞組3只大鼠。TMP組大鼠傷后30分鐘開(kāi)始予以川芎秦注射液經(jīng)腹腔內(nèi)注射200mg/kg,每天給藥一次,3天組大鼠用藥3天,7天組大鼠共用藥5天。NS組大鼠給予等量的生理鹽水經(jīng)腹腔內(nèi)注射,給藥次數(shù)和實(shí)驗(yàn)組相同。造模后在相應(yīng)的時(shí)間點(diǎn)處死大鼠并切取脊髓標(biāo)本,每只大鼠取以損傷段為中心的長(zhǎng)約6mm的脊髓組織。加入裂解液提取脊髓

3、蛋白質(zhì)后進(jìn)行蛋白質(zhì)樣品濃度測(cè)定。以1000ug的上樣量進(jìn)行雙向凝膠電泳,蛋白質(zhì)凝膠采用考馬斯亮藍(lán)染色后用PDQuest-8.0.1圖象分析軟件進(jìn)行凝膠圖像分析,尋找并切取差異表達(dá)的蛋白質(zhì)斑點(diǎn)。用胰酶進(jìn)行膠內(nèi)原位酶解,獲得的小肽片段采用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)進(jìn)行質(zhì)譜分析。獲取肽質(zhì)量指紋圖譜后采用MascotWizard軟件查詢SWISS-PROT和NCBInr數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索,鑒定差異蛋白質(zhì)?；谖墨I(xiàn)復(fù)

4、習(xí)對(duì)檢索鑒定的差異蛋白質(zhì)進(jìn)行初步功能分析。
　　 結(jié)果：通過(guò)固相PH梯度雙向凝膠電泳獲得了分辨率較高的雙向凝膠電泳圖譜,圖像分析后發(fā)現(xiàn)兩組圖譜間存在較明顯差異,應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜成功鑒定出了差異蛋白質(zhì)。3天組共鑒定出了15個(gè)差異蛋白質(zhì),表達(dá)上調(diào)的有血清白蛋白前體、低分子量神經(jīng)絲蛋白、波形蛋白、神經(jīng)纖維酸性蛋白、α-1A微管蛋白、β-2A微管蛋白、β-2C微管蛋白、亮氨酸氨基肽酶、二氫嘧啶酶相關(guān)蛋白2,表達(dá)下調(diào)的

5、有α-互聯(lián)蛋白、60kDa熱休克蛋白、71kDa熱休克蛋白同源蛋白、70kDa,熱休克蛋白相關(guān)蛋白2、β-1熱休克蛋白、磷脂結(jié)合蛋白1；7天組共鑒定出了19個(gè)差異蛋白質(zhì),表達(dá)上調(diào)的有血清白蛋白前體、α-1A微管蛋白、β-2A微管蛋白、低分子量神經(jīng)絲蛋白、中分子量神經(jīng)絲蛋白、乙醛脫氫酶、鳥(niǎo)嘌呤核苷酸結(jié)合蛋白β1亞基、β肌動(dòng)蛋白、波形蛋白、神經(jīng)纖維酸性蛋白,表達(dá)下調(diào)的有H2異性核蛋白、帕金森病蛋白7同系物、囊泡相關(guān)膜蛋白B、泛素結(jié)合酶E2N