1、鑒于Y染色體微缺失的重要臨床診斷意義，1999年和2004年，歐洲男科協(xié)會(European Academy of Andrology,EAA)/歐洲分子遺傳質(zhì)量協(xié)作網(wǎng)(European Molecula RGenetics Quality Network,EMQN)兩次出版Y染色體微缺失分子診斷指南，建議采用6個STS位點(sY84、sY86、sY127、sY134、sY254、sY255)多重PCR方法篩查Y染色體微缺失。
　

2、　 如今，Y染色體微缺失的篩查已在我國大多數(shù)醫(yī)院的生殖中心廣泛開展，但在STS位點的選擇上意見不一，尚無統(tǒng)一的適合中國人的檢測位點及嚴格的質(zhì)量控制體系。AZFc微缺失在所有缺失類型中最常見，且臨床表現(xiàn)復雜，因此將AZFc微缺失的類型進一步細分，將有助于研究AZFc微缺失的臨床意義；且國內(nèi)AZFc篩查應該使用哪些序列標簽位點也備受爭議。sY145、sY152分布在AZFc區(qū)靠近AZFb的區(qū)域，sY157定位于AZFc亞區(qū)的遠端，在6位點

3、的基礎(chǔ)上，增加此3個位點進一步分析AZFc缺失的類型判斷所增加的位點是否為AZFc微缺失篩查必須的，以提高臨床診斷的準確性；并檢測AZFc微缺失患者的sY1191、sY1197、sY1054、sY1125及sY1206，以闡明中國人群AZFc微缺失的斷裂范圍。204例嚴重少精子癥或非梗阻性無精子癥患者中，AZFb(sY127、sY134)缺失2例，發(fā)生率為0.9％；而AZFc(sY255、sY254、sY157)缺失達14例，發(fā)生率為6

4、.8％；對照組105例均未發(fā)現(xiàn)AZF微缺失，兩組比較差別有統(tǒng)計學意義；并發(fā)現(xiàn)1例sY157單一缺失男性(命名為LI-157)，發(fā)生率為0.5％。共收集194例sY254、sY255缺失的男性均未見sY145、sY152缺失，其中有192例同時伴有sY157缺失(占99％)；另外2例僅見sY254、sY255缺失(占1％)。發(fā)現(xiàn)AZFc微缺失模式共5種，其中常見為sY1191(-)、sY1054(-)、sY1206(-)、sY1197(+

5、)、sY1125(+)；sY1191(+)、sY1054(-)、sY1206(-)、sY1197(+)、sY1125(+)。由此可見，sY254、sY255和sY157缺失是中國人群AZFc微缺失的最常見類型；AZFc微缺失者sY145和sY152均不缺失，且AZFc斷裂位點分析顯示sY145和sY152分布于AZFc以外，因此不建議作為AZFc常規(guī)篩查的位點。對“LI-157”的深入分析，發(fā)現(xiàn)sY1161、sY1191、sY1291、

6、sY1201均為(+)，sY1206為(-)；DAZ(deletedinazoospermia)基因拷貝數(shù)的分析顯示為DAZ3/DAZ4基因拷貝缺失。可見，“sY157單一缺失”可能是中國人群AZFc部分缺失的一種新類型，其同時伴DAZ3/DAZ4缺失可能是導致嚴重少精子癥的原因之一，其臨床意義值得進一步探討。
　　 9個序列標簽位點多重PCR篩查AZF微缺失，發(fā)現(xiàn)中國人群AZF篩查結(jié)果中sY84(-)、sY86(+)的發(fā)生率高

7、達11.6％，探究是何原因，并建立簡易的判斷方法。
　　 多重PCR篩查630位男性，包括204位精子濃度小于5×106/mL的不育男性、226位精子濃度≥15×106/ml的患者和200位健康捐精者，三組的發(fā)生率無明顯差異，(P=0.509)。對AZF微缺失篩查結(jié)果為sY84(-)和sY86(+)的73名男性進行測序分析，測序分析顯示這73名男性均有sY84，且發(fā)現(xiàn)sY84反向引物第五位堿基發(fā)生T-G改變(rs72609647

8、)，正是該單核苷酸多態(tài)性影響了多重PCR中sY84的擴增效率，并導致了中國人群AZF微缺失篩查中sY84的假陽性。針對rs72609647設(shè)計等位基因特異性PCR(Allele-specificpolyme rasechainreaction,As-PCR)分辨單核苷酸多態(tài)性的堿基類型，有利于甄別假陽性，實驗結(jié)果顯示該法分辨sY84A型的準確性達98％、sY84C型的準確性達100％。
　　 由本研究可知，單sY157缺失伴DA

9、Z基因拷貝的缺失可導致男性生精功能障礙，且其發(fā)生率高于AZFa微缺失，其臨床意義值得深入探討。對中國人進行AZF多重PCR篩查可能出現(xiàn)sY84的假陽性，建立合適中國人群的AZF篩查序列標簽位點和引物尚需進一步的研究。
　　 目的：探討中國人群無精子因子C(azoospermiafactoRc,AZFc)微缺失的類型及AZFc多重PCR篩查時序列標簽位點(sequencetaggedsite,STS)的選擇。
　　 方法：

10、采用多重PCR反應測定9個STS位點(sY84、sY86、sY127、sY134、sY152、sY145、sY255、sY254、sY157)篩查204例嚴重少精子癥或非梗阻性無精子癥(Non-obstructive azoospermia,NOA)漢族男性Y染色體微缺失，并以精子濃度正常的男性105例作為對照；同時對多中心來源的180例已確診為sY254、sY255缺失的男性進行sY145、sY152和sY157位點分析。對特殊病例做

11、AZFc區(qū)STS位點的分析和DAZ基因拷貝數(shù)的檢測。
　　 結(jié)果：204例嚴重少精子癥或非梗阻性無精子癥男性中AZFc缺失者14例(6.8％)，單一sY157缺失患者1例，AZFb缺失2例，未發(fā)現(xiàn)AZFa缺失；共194例sY254、sY255缺失男性的sY145、sY152均未缺失，而sY157未缺失者僅2例。發(fā)現(xiàn)1例單sY157缺失的嚴重少精子癥男性為sY1206缺失和DAZ基因中DAZ3/DAZ4基因拷貝缺失。