1、錐蟲亞屬三個種：布氏錐蟲、伊氏錐蟲和馬媾疫錐蟲分別引起家畜的那加那病、蘇拉病和媾疫病，給疫區(qū)國家造成巨大的經(jīng)濟損失，是家畜業(yè)最重要的寄生蟲病之一。 關于伊氏錐蟲和馬媾疫錐蟲的起源以及錐蟲亞屬三個種之間的進化關系還存在眾多爭議。本論文采用MGE-，SSR-和RAPD-PCR三種分子標記技術研究了分離自中國、非洲和南美洲的18個錐蟲蟲株(包括5株布氏錐蟲、10株伊氏錐蟲和3株馬媾疫錐蟲)之間的遺傳相似性。利用三種分子標記技術，在所有

2、18個蟲株中共獲得890多條典型條帶片段，片段大小介于0.2kb到2kb之間，每個蟲株獲得的典型條帶數(shù)介于39條到59條之間。每兩蟲株之間的遺傳相似系數(shù)(SC)從～41％到～94％不等，平均相似系數(shù)為～65％，同布氏錐蟲和馬媾疫錐蟲相比，伊氏錐蟲內部的遺傳相似度最高，平均遺傳相似系數(shù)為～79％，而前兩者分別為～59％和～65％。根據(jù)各蟲株之間的遺傳相似系數(shù)構建系統(tǒng)發(fā)生樹，結果顯示，如果不考慮種的因素，絕大多數(shù)分離自中國和南美洲的蟲株聚類

3、于同一個進化枝，而幾乎所有來自非洲的蟲株單獨成簇(除布氏錐蟲AnTat2.1株外)，因此，盡管伊氏錐蟲和布氏錐蟲有各自單獨成簇的趨勢，利用該三種分子標記并不能明確區(qū)分三種錐蟲。研究結果支持伊氏錐蟲和馬媾疫錐蟲均源自變異的布氏錐蟲，而伊氏錐蟲源于馬媾疫錐蟲突變株的假說。此外，本論文還探討了地理因素對錐蟲亞屬內各種間進化的影響。 迄今為止，錐蟲亞屬三個種之間的分子鑒別還是一個難題，給從事該領域研究的寄生蟲學家造成很大的困惑，而該三種

4、錐蟲最為明顯的分子差別應為動基體DNA(包括大環(huán)和小環(huán))的差異。本論文的另一個研究目的是根據(jù)布氏錐蟲動基體大環(huán)DNA序列設計特異的PCR引物反應來鑒別布氏錐蟲、伊氏錐蟲和馬媾疫錐蟲并評估其在野外診斷中的潛在應用價值。我們根據(jù)布氏錐蟲動基體大環(huán)DNANADH脫氫酶亞單位5(ND5)設計的引物對9株布氏錐蟲(包括7株指名亞種和2株羅得西亞亞種)、10株伊氏錐蟲、5株馬媾疫錐蟲、2株活潑錐蟲及1株剛果錐蟲進行了PCR擴增，同時采用錐蟲亞屬特異

5、的TBR-PCR作為錐蟲基因組質控標準，結果表明從所有布氏錐蟲和馬媾疫錐蟲蟲株中都可以擴增出～395bp的目標片段，而所有伊氏錐蟲、活潑錐蟲、剛果錐蟲及宿主DNA均顯示陰性結果。利用該PCR方法可以快速將布氏錐蟲和馬媾疫錐蟲從伊氏錐蟲中區(qū)分開來，其檢測靈敏度為20-25條蟲/PCR反應(用基因組DNA或處理過的感染錐蟲的血液樣品)。在此基礎上，我們分析了該方法的可靠性，并探討了動基體DNA差異在錐蟲亞屬種間進化上的反映。 氨基脲

6、敏感的胺氧化酶(SSAO)廣泛分布于血管平滑肌細胞膜、脂肪細胞以及血液中，該酶介導其內源性底物甲胺的脫氨基作用，產(chǎn)生甲醛和過氧化氫。近來的研究表明體內SSAO的含量同一系列疾病(如糖尿病、心血管疾病、阿爾茨默氏病)密切相關，因此對其研究越來越受重視。在本論文中我們檢測了人臍帶動脈粗提物、山羊血清、兔血清、胎牛血清和小鼠血清中的SSAO活性，并分析了它們介導的甲胺脫氨基作用對布氏錐蟲的細胞毒影響，結果表明該酶在其底物甲胺濃度高于10-4M

7、時對培養(yǎng)的錐蟲具有明顯的細胞毒性，該毒性作用可以被SSAO的抑制劑氨基脲或MDL-72974A消除，因此我們認為該毒性作用是由SSAO介導的甲胺脫氨基所產(chǎn)生的甲醛和過氧化氫導致的，而我們的實驗也表明甲醛和過氧化氫對錐蟲的生長具有明顯毒性，其半數(shù)致死濃度均為～10-5M，這是SSAO介導殺錐蟲甚至其他微生物的主要機制。此外我們分析發(fā)現(xiàn)山羊、兔、牛和小鼠四種動物血清中SSAO活性與錐蟲感染蟲血癥水平之間密切相關，因此，我們認為“SSAO-甲