1、目的：糖尿病腎?。―iabeticNephropathy，DN）又稱糖尿病腎小球硬化癥，是糖尿?。―iabetesMellitusDM）全身微血管并發(fā)癥之一。多年來，國內(nèi)外。腎臟病學(xué)者都在不斷探索糖尿病腎病的發(fā)病機(jī)理及治療方法，但目前發(fā)病機(jī)制尚未十分明了，也未找到有效的治療方法，因此尋找防止或延緩糖尿病腎病發(fā)生發(fā)展的有效途徑和方法己成為世界范圍的重大課題。近十幾年來我國中醫(yī)藥界也廣泛的開展了中醫(yī)藥防治糖尿病腎病的研究，且逐漸顯示出較大的

2、潛力和廣闊的應(yīng)用前景。在前期臨床實踐中，我們根據(jù)中醫(yī)病因病機(jī)學(xué)理論，逐步認(rèn)識到該病的病情雖然復(fù)雜，但在早期和中期大多以氣陰兩虛、瘀血阻絡(luò)、癥瘕積聚為其基本病機(jī)，治療當(dāng)以益氣養(yǎng)陰、消瘕通絡(luò)為主，為此我們結(jié)合多年的臨床用藥經(jīng)驗，擬定了以益氣養(yǎng)陰、消癥通絡(luò)為主的中藥復(fù)方制劑，該方在臨床上治療早中期的糖尿病腎病，取得了良好的臨床療效。為了進(jìn)一步證實該方的治療作用，探討其可能的機(jī)制，進(jìn)行了本項研究。即借助糖尿病腎病動物模型，觀察其對糖尿病腎病大鼠

3、干預(yù)作用及對腎小球足細(xì)胞和裂孔膜以及腎小球系膜細(xì)胞的影響。
　　 方法：
　　 1.益氣養(yǎng)陰消癥通絡(luò)中藥對糖尿病腎病大鼠干預(yù)作用選用SPF級健康雄性SD大鼠110只，普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)一周，分別檢測尿蛋白陰性后行左腎摘除術(shù)。2周后隨機(jī)分為單純腎切組10只，造模組100只。造模組大鼠一次性腹腔注射鏈脲佐菌素（STZ）40mg/kg，72小時后測血糖，以三次連續(xù)測血糖≥16.7mmol/L為DM模型成模標(biāo)準(zhǔn)。造模組在DM模型

4、成模后，隨機(jī)分為模型組（Model）、厄貝沙坦組（Irbesatan）、中藥低劑量組、中藥中劑量組、中藥高劑量組，各20只。厄貝沙坦組大鼠給予厄貝沙坦15mg·kg-1·d-1灌胃，中藥低、中、高劑量組大鼠分別給予中藥5.29g-kg-1·d-1、10.58g·kg-1·d-1、21.16g·kg-1·d-1灌胃，余組給予等劑量生理鹽水灌胃，每日給藥一次，連續(xù)給藥6周。于給藥第6周末，收集24h尿液，稱體重，股動脈采血，處死大鼠，右腎稱

5、重，分離皮髓質(zhì)，檢測各組大鼠24h尿蛋白定量，血糖、糖化血紅蛋白、血脂、肌酐、尿素氮。
　　 2.益氣養(yǎng)陰消癥通絡(luò)中藥對糖尿病大鼠腎臟病理形態(tài)學(xué)的影響同上方法復(fù)制糖尿病腎病大鼠模型，于注射STZ第6周末，留取腎組織標(biāo)本，行光鏡及電鏡超微結(jié)構(gòu)檢查。通過觀察益氣養(yǎng)陰消癥通絡(luò)中藥治療糖尿病腎病大鼠前后的病理形態(tài)學(xué)改變情況，探討該中藥復(fù)方制劑防治DN的作用。
　　 3.益氣養(yǎng)陰消癥通絡(luò)中藥對糖尿病大鼠腎小球足細(xì)胞和裂孔膜的影響同

6、上方法復(fù)制糖尿病腎病大鼠模型，于注射STZ第6周末，留取腎組織標(biāo)本，觀察益氣養(yǎng)陰消癥通絡(luò)中藥對DN大鼠腎組織Nephrin、Podocin、CD2AP、WT-1的影響，進(jìn)一步探討其對糖尿病腎病可能的作用機(jī)制。
　　 4.益氣養(yǎng)陰消癥通絡(luò)中藥對高糖聯(lián)合AngⅡ培養(yǎng)的大鼠腎小球系膜細(xì)胞分泌CTGF、TGF-β1及FN、LN影響的實驗研究本研究采用體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，在高糖環(huán)境下，選用AngⅡ誘導(dǎo)系膜細(xì)胞（MCs）增殖，給予大鼠的含藥血

7、清干預(yù)后，進(jìn)行系膜細(xì)胞爬片和胞漿蛋白的提取，用Elisa方法檢測培養(yǎng)大鼠腎小球系膜細(xì)胞上清液中TGF-β1、纖維粘連蛋白（FN）、層粘連蛋白（LN）的蛋白表達(dá)，westernblot法檢測CTGF的表達(dá)。從細(xì)胞水平探討其延緩腎小球硬化的作用機(jī)制，為進(jìn)一步研究其防治腎小球硬化的作用機(jī)理提供依據(jù)。
　　 結(jié)果：
　　 1.益氣養(yǎng)陰消癥通絡(luò)中藥對糖尿病腎病大鼠的干預(yù)作用1.1各組大鼠24h尿蛋白定量的比較與單純腎切組比較：模型

8、組、各治療組UPro升高（P<0.05）；與模型組比較：厄貝沙坦、中藥低、中劑量組UPro下降（P<0.05），中藥高劑量組UPro無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），厄貝沙坦、中藥低、中劑量組之間無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　 1.2各組大鼠糖化血紅蛋白（HbAlC）的比較與單純腎切組比較：模型組、各治療組血糖、糖化血紅蛋白升高（P<0.05）；與模型組比較：厄貝沙坦、中藥低、中、高劑量組血糖、糖化血紅蛋白無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0

9、.05）。
　　 1.3各組大鼠血脂的比較與單純腎切組比較：模型組、各治療組血清總膽固醇（TC）升高（P<0.01），模型組、中藥各治療組甘油三酯（TG）升高（P<0.05或P<0.01），厄貝沙坦治療組TG無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；與模型組比較：各治療組TC、TG均降低（P<0.05或P<0.01）；與中藥低劑量組比較：厄貝沙坦、中藥中、高劑量組TC較高（P<0.01），中藥中、高劑量組TG較高（P<0.01），厄貝沙坦治

10、療組TG無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　 1.4各組大鼠腎功能的比較與單純腎切組比較：模型組血肌酐、尿素氮值升高（P<0.01），各治療組血肌酐值無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），尿素氮值升高（P<0.01）；與模型組比較：各治療組血肌酐值下降（P<0.05），中藥低、高劑量組尿素氮值下降（P<0.05），余組尿素氮值無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　 2.腎臟病理形態(tài)學(xué)觀察光鏡觀察：單純腎切組大鼠腎臟腎小球未見明顯肥

11、大，毛細(xì)血管基底膜無增厚，系膜細(xì)胞數(shù)量與系膜基質(zhì)分布面積大小正常，腎小管間質(zhì)無明顯病理改變。模型組大鼠腎臟腎小球明顯肥大，毛細(xì)血管基底膜增厚，系膜區(qū)增寬，腎小管上皮細(xì)胞空泡變性或顆粒變性。厄貝沙坦、中藥各劑量組以上病理改變較模型組為輕，各治療組間差別不明顯。
　　 3.益氣養(yǎng)陰消癥通絡(luò)中藥對糖尿病大鼠腎小球足細(xì)胞和裂孔膜的影響3.1各組大鼠腎皮質(zhì)Nephrin，CD2AP，PodocinmRNA表達(dá)3.1.1NephrinmRN

12、A表達(dá)與單純腎切組比較：模型組和各治療組nephrinmRNA表達(dá)明顯下降（P<0.05）。與模型組比較：各治療組nephrinmRNA表達(dá)明顯上升（P<0.05）；各治療組比較則無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　 3.1.2CD2APmRNA表達(dá)與單純腎切組比較：模型組和各治療組CD2APmRNA表達(dá)明顯下降（P<0.05）。與模型組比較：各治療組CD2APmRNA表達(dá)明顯上升（P<0.01或P<0.05）；各治療組比較則無

13、統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　 3.1.3PodocinmRNA表達(dá)與單純腎切組比較：模型組和各治療組PodocinmRNA表達(dá)下降（P<0.05）。與模型組比較：各治療組PodocinmRNA表達(dá)上升（P<0.01或P<0.05）；各治療組間PodocinmRNA表達(dá)無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　 3.2各組大鼠腎組織Nephrin，CD2AP，WT-1蛋白表達(dá)3.2.1Nephrin蛋白表達(dá)與單純腎切組比較

14、：模型組、各治療組Nephrin蛋白表達(dá)下降（P<0.05）。與模型組比較：厄貝沙坦組和中藥低劑量組Nephrin蛋白表達(dá)增加（P<0.05），中藥中、高劑量組Nephrin蛋白表達(dá)無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　 3.2.1CD2AP蛋白表達(dá)與單純腎切組比較：模型組、各治療組CD2AP蛋白表達(dá)下降（P<0.05）。與模型組比較：厄貝沙坦組和中藥低劑量組CD2AP蛋白表達(dá)增加（P<0.05），中藥中、高劑量組CD2AP蛋白表

15、達(dá)無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　 3.2.3WT-1蛋白表達(dá)與單純腎切組比較：模型組、各治療組WT-1蛋白表達(dá)下降（P<0.05）。與模型組比較：厄貝沙坦組和中藥高劑量組WT-1蛋白表達(dá)增加（P<0.05），中藥中、低劑量組WT-1蛋白表達(dá)無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　 4.益氣養(yǎng)陰消癥通絡(luò)中藥對高糖聯(lián)合AngⅡ培養(yǎng)的大鼠腎小球系膜細(xì)胞和TGF-β1、CTGF表達(dá)的實驗研究4.1TGF-β1含量測定與低糖對照

16、組比較，余組TGF-β1含量均明顯升高（P<0.01）；與高糖組比較，高糖+AngⅡ組TGF-β1含量明顯升高（P<0.01）；與高糖組+AngⅡ組比較，厄貝沙坦血清、中藥血清組TGF-β1含量明顯下降（P<0.01）；兩藥物血清組之間比較無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　 4.2CTGF蛋白表達(dá)與低糖對照組比較，余組CTGF蛋白表達(dá)明顯升高（P<0.05）；與高糖組比較，高糖+AngⅡ組CTGF蛋白表達(dá)明顯升高（P<0.05

17、）；與高糖+AngⅡ組比較，厄貝沙坦血清、中藥血清組CTGF蛋白表達(dá)明顯下降（P<0.01）；兩藥物血清組之間CTGF蛋白表達(dá)無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。4-3FN、LN含量測定與低糖對照組比較，余組FN、LN含量均明顯升高（P<0.01）；與高糖組比較，高糖+AngⅡFN、LN含量明顯升高（P<0.01）：與高糖組+AngⅡ組比較，厄貝沙坦血清、中藥血清組FN、LN含量明顯下降（P<0.01）；兩藥物血清組之間比較無統(tǒng)計學(xué)意義（P>

18、0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1.益氣養(yǎng)陰消癥通絡(luò)中藥能夠改善DN大鼠一般狀況，減少尿蛋白的排泄及降低血脂，顯著改善腎功能。
　　 2.益氣養(yǎng)陰消癥通絡(luò)中藥可減輕腎組織病理損害，從而延緩DN的進(jìn)展。
　　 3.益氣養(yǎng)陰消癥通絡(luò)中藥可保護(hù)腎小球濾過屏障外層裂孔膜和足細(xì)胞的結(jié)構(gòu)與功能，延緩糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展。
　　 4.益氣養(yǎng)陰消癥通絡(luò)中藥可抑制系膜細(xì)胞分泌TGF-β1和CTGF，減少細(xì)胞外基質(zhì)