1、[背景和目的]
　　 人類杯狀病毒(HumanCaliciviruses，HuCVs)包括諾如病毒(Norovirus，NV)和札如病毒(Sapovirus，SAV)，是引起全世界人類非細(xì)菌性急性胃腸炎暴發(fā)的主要病原，也是僅次于輪狀病毒引起嬰幼兒急性腹瀉散發(fā)的常見(jiàn)病原之一。
　　 諾如病毒又稱諾瓦克樣病毒(Norwalk-likevirus)，最初由Kapikian等在1972年通過(guò)免疫電鏡的方法從美國(guó)俄亥俄州諾瓦克鎮(zhèn)一

2、起非細(xì)菌性胃腸炎暴發(fā)的患者糞便中分離得到；札如病毒(Sapovirus，SAV)以前稱札幌樣病毒(Sapporo-likevirus)，因最初于1977年在日本札幌市被發(fā)現(xiàn)而命名，是人和豬非細(xì)菌性急性胃腸炎的主要病原體之一。長(zhǎng)期以來(lái)，由于對(duì)杯狀病毒缺乏簡(jiǎn)易、敏感的檢測(cè)手段，使其導(dǎo)致人類患病的危害被嚴(yán)重低估。
　　 近年來(lái)，隨著對(duì)杯狀病毒分子流行病學(xué)研究的深入，其重要性和危害性正逐漸被全面、系統(tǒng)的認(rèn)識(shí)。2005年1月，加拿大和美國(guó)

3、相繼宣布暴發(fā)NV感染，引起了人們的廣泛關(guān)注。2006年11月，日本、新加坡、意大利等地相繼發(fā)生了NV集體感染事件，特別是日本暴發(fā)了25年來(lái)最嚴(yán)重的傳染性胃腸炎疫情，不到兩個(gè)月累計(jì)發(fā)生35.76萬(wàn)人感染NV，引起了全球的廣泛關(guān)注。同期我國(guó)包括北京、廣東佛山、福建等省市均出現(xiàn)NV疫情，據(jù)全國(guó)病毒性腹瀉監(jiān)測(cè)網(wǎng)對(duì)11個(gè)省份5歲以下腹瀉兒童的監(jiān)測(cè)，NV檢出率為15％左右。由于該病毒傳染性很強(qiáng)，?？蓪?dǎo)致突發(fā)性公共衛(wèi)生事件，美國(guó)已將其列為乙類生物恐怖

4、因子。美國(guó)疾病控制中心(CDC)最新估計(jì)，96％的非細(xì)菌胃腸炎暴發(fā)與NV有關(guān)，而SAV則是嬰兒和小齡兒童病毒性腹瀉的主要病原體。
　　 我國(guó)對(duì)諾如病毒的研究起步較晚，1995年方肇寅等首次在我國(guó)嬰幼兒腹瀉糞便標(biāo)本中檢測(cè)到諾如病毒。此后，北京、長(zhǎng)春、河北、蘭州、廣州、福州等地均在兒童腹瀉糞便標(biāo)本中檢出NV。最近方肇寅等人在對(duì)1999年至2005年來(lái)自我國(guó)13個(gè)地區(qū)的嬰幼兒腹瀉糞便HuCVs研究中其陽(yáng)性率為8.3％～38.6％，主要

5、以NV為主，檢出率僅次于RV，表明我國(guó)AGE病例中NV感染也相當(dāng)普遍。
　　 札如病毒在世界各地都有報(bào)道，2005年2月，日本某幼兒園中23人(包括6名成人)感染SAV病毒。我國(guó)上海交大華修國(guó)等于2008年在國(guó)內(nèi)不明原因腹瀉人群與腹瀉仔豬體內(nèi)分離到一種新的杯狀病毒，經(jīng)過(guò)鑒定和動(dòng)物回歸實(shí)驗(yàn)證明該病毒為SAV。目前，國(guó)際上SAV的總體研究水平還處于起步階段。
　　 雖然杯狀病毒感染在我國(guó)普遍存在，但是浙江地區(qū)杯狀病毒感染的分

6、子流行特征尚缺乏系統(tǒng)研究，因此，研究杯狀病毒在浙江地區(qū)的分子流行病學(xué)規(guī)律、流行毒株特征及進(jìn)化情況，可以為本地區(qū)杯狀病毒引起的急性腹瀉的防治提供科學(xué)依據(jù)，對(duì)我國(guó)急性腹瀉的預(yù)防控制工作也具有重要意義。
　　 [對(duì)象和方法]
　　 1.研究對(duì)象
　　 2009年1月至2011年1月來(lái)自浙江地區(qū)5個(gè)哨點(diǎn)醫(yī)院腸道門診(包括杭州、寧波、紹興、湖州、衢州)就診的急性腹瀉患者3153例，包括5歲以下嬰幼兒和成人。每日腹瀉次數(shù)超過(guò)

7、3次或大便性狀出現(xiàn)明顯異常(水瀉樣、蛋花湯樣、粘液樣或粘糊樣)定義為腹瀉病例。
　　 2.實(shí)驗(yàn)方法
　　 2009-2011年監(jiān)測(cè)期間連續(xù)收集以上3153例急性腹瀉患者的糞便標(biāo)本，并同時(shí)進(jìn)行調(diào)查，填寫調(diào)查表，電話隨訪完善調(diào)查表。對(duì)收集的標(biāo)本采用多重PCR方法進(jìn)行輪狀病毒(RV)、杯狀病毒(NV和SAV)等病毒檢測(cè)，并選取部分?jǐn)U增后的杯狀病毒陽(yáng)性產(chǎn)物進(jìn)行序列測(cè)定，應(yīng)用DNAMAN(5.1.0.0)和MEGA4.0軟件對(duì)杯狀

8、病毒和相關(guān)參考株進(jìn)行序列的多重比對(duì)和系統(tǒng)進(jìn)化分析。
　　 [結(jié)果]
　　 1.2009年1月至2011年1月，本研究共檢測(cè)浙江地區(qū)3153份急性腹瀉標(biāo)本，杯狀病毒檢出率較高，為18.42％，僅次于輪狀病毒的檢出率(20.10％)。
　　 2.諾如病毒共檢出265份(12.36％，265/2144；52份為NV-GⅠ基因型，213份為NV-GⅡ基因型)；札如病毒檢出率為6.06％(130/2144)。<5歲組檢出率

9、最高，其次是15～65歲組，5～15歲組檢出率最低。浙江地區(qū)急性腹瀉患者中杯狀病毒感染全年均有發(fā)生，以冬春季節(jié)(11～4月)感染較多，另外夏季(6～8月)檢出率也相對(duì)較高。
　　 3.隨機(jī)抽取15株諾如病毒和10株SAV進(jìn)行測(cè)序分析，NV基因型別包括：GⅠ-1(3株)、GⅠ-2(1株)、GⅡ-4/2006b變異株(7株)、GⅡ-2(1株)、GⅡ-7(1株)和GⅡ-4/2008變異株(2株)；SAV基因型別包括：GⅠ-2(5株)、

10、GⅠ-1(4株)和GⅡ-1(1株)。
　　 [結(jié)論]
　　 1.杯狀病毒是浙江地區(qū)引起急性腹瀉的一個(gè)重要病原，僅次于輪狀病毒的檢出率，且諾如病毒檢出率高于札如病毒。該病毒主要感染五歲以下嬰幼兒，冬春季節(jié)為感染高發(fā)季節(jié)。
　　 2.浙江地區(qū)急性腹瀉患者杯狀病毒感染呈現(xiàn)遺傳多樣性特征，諾如病毒在浙江地區(qū)包括GⅠ-1、GⅠ-2、GⅡ-2、GⅡ-7、GⅡ-4五個(gè)基因型，GⅡ-4/2006b可能是本地區(qū)的流行優(yōu)勢(shì)株；札如病