1、浙江大學(xué)博士學(xué)位論文Dll4Notch信號(hào)途徑對(duì)胃癌生物學(xué)行為的影響及機(jī)制研究姓名：李國(guó)剛申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：外科學(xué)(普外)指導(dǎo)教師：陳力20120529浙江大學(xué)博士學(xué)位論文摘要增殖，分化與凋亡等生物學(xué)行為。Dll4作為Notch信號(hào)途徑的五個(gè)配體之一，對(duì)血管生成發(fā)揮著決定性的調(diào)節(jié)作用。近年來(lái)的研究表明Notch信號(hào)途徑不僅調(diào)控血管生成，也對(duì)腫瘤的進(jìn)展發(fā)揮著重要作用，因而被認(rèn)為是一個(gè)潛在的治療靶點(diǎn)。有趣的是，Notch信號(hào)途徑在不同

2、的實(shí)體瘤中可能起著截然不同的生物學(xué)作用。在胰腺癌，結(jié)腸癌、乳腺癌等大多數(shù)實(shí)體瘤中表現(xiàn)為致癌作用，而在部分皮膚癌，肺癌及前列腺癌中表現(xiàn)為抑癌作用。與其他實(shí)體瘤相比，Notch信號(hào)途徑在胃癌惡性生物學(xué)行為中的作用及其機(jī)制的相關(guān)研究報(bào)道較少。在本實(shí)驗(yàn)中，我們首先利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR、w色st鋤blott她及免疫熒光技術(shù)研究Dll州otCh信號(hào)通路相關(guān)基因及蛋白在胃癌細(xì)胞系表達(dá)情況，并利用免疫組化方法檢測(cè)30例臨床胃癌標(biāo)本中DIl4蛋白表達(dá)情

3、況及其分布，發(fā)現(xiàn)Dll4及Notchl胞內(nèi)段NIcD在5株胃癌細(xì)胞系中均有陽(yáng)性表達(dá)，Dll4蛋白在胃癌組織中的表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于癌旁及正常胃粘膜組織；隨后，進(jìn)一步在體外培養(yǎng)胃癌細(xì)胞系中研究了DIl州otch異常激活對(duì)胃癌增殖、侵襲、遷移及化療藥物敏感性等生物學(xué)行為的影響，并在荷瘤BALB／C雄性小鼠體內(nèi)研究了Dll4／Notch異常激活對(duì)胃癌生長(zhǎng)的影響。另外，我們初步研究了丫分泌酶抑制劑D。6胛對(duì)體外培養(yǎng)的胃癌細(xì)胞增殖的影響。2實(shí)驗(yàn)方法

4、21Dll4及其主要受體NotChl在胃癌細(xì)胞系中的表達(dá)：利用RealTiIncPCR、w，estemblotting與免疫熒光在mRNA與蛋白水平檢測(cè)Dll4及Notchl受體活性胞內(nèi)段NICD在胃癌細(xì)胞系中的表達(dá)水平。22Dll4在臨床胃癌標(biāo)本中的表達(dá)及其分布：利用免疫組化方法檢測(cè)Dll4在30例臨床胃癌組織、癌旁及正常胃粘膜組織中的表達(dá)及分布。23構(gòu)建pEGFPC1Dll4過(guò)表達(dá)載體并建立過(guò)表達(dá)D114穩(wěn)轉(zhuǎn)胃癌細(xì)胞系：為研究Dll