1、一氧化氮(NO)在生物體內(nèi)作為一種反應(yīng)性極強(qiáng)的自由基,具有廣泛的生理作用。NO通過(guò)結(jié)合紅細(xì)胞血紅蛋白(Hb)中保守的β93Cys殘基(Hbβ93Cys)形成S-亞硝基血紅蛋白(SNO-Hb)。而Hb分子內(nèi)NO能從血紅素轉(zhuǎn)移至Hbβ93Cys巰基,調(diào)節(jié)NO的貯存與釋放,介導(dǎo)血管舒張。庫(kù)血紅細(xì)胞隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng),NO會(huì)發(fā)生大量流失,導(dǎo)致紅細(xì)胞擴(kuò)血管活性、紅細(xì)胞變形能力及血紅蛋白攜氧能力等生理活性下降。因此,了解紅細(xì)胞存儲(chǔ)過(guò)程中NO的流失問(wèn)

2、題,認(rèn)識(shí)NO在循環(huán)系統(tǒng)中的作用機(jī)理,對(duì)保障紅細(xì)胞輸注的安全性和有效性具有極其重要理論意義和臨床價(jià)值。本研究擬通過(guò)補(bǔ)充N(xiāo)O來(lái)改善紅細(xì)胞的形態(tài)和功能,,探討NO對(duì)紅細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響機(jī)制,為紅細(xì)胞的有效保存,提供可參考的理論依據(jù)。
　　目的:本次實(shí)驗(yàn)對(duì)保存期間的懸浮紅細(xì)胞補(bǔ)充不同濃度梯度的NO試劑:L-Arginine(L-精氨酸/NO前體),分析懸浮紅細(xì)胞不同保存時(shí)相的紅細(xì)胞變形性相關(guān)指標(biāo),以期探討NO與庫(kù)血紅細(xì)胞變形性的影響機(jī)制,從

3、而進(jìn)一步評(píng)價(jià)儲(chǔ)存懸浮紅細(xì)胞的儲(chǔ)存質(zhì)量。
　　方法:取10例各1u新鮮懸浮紅細(xì)胞,每例分裝成4mL/管,總計(jì)500管,進(jìn)行編組編號(hào),保存于專(zhuān)用儲(chǔ)存冰箱內(nèi)。在儲(chǔ)存的不同時(shí)相(3h、1d、3d、5d、7d、14d、21d、28d),每例樣本各取5管,其中1管不做處理,為對(duì)照組(A組),另外4管分別和不同濃度L-精氨酸(NO前體)混合培養(yǎng),濃度分別為1μM(B)、5Μm(C)、10Μm(D)、50Μm(E)。培養(yǎng)1小時(shí)后測(cè)定觀察指標(biāo)。主要

4、有:(1)紅細(xì)胞變形性相關(guān)指標(biāo):血液高切粘度、低切粘度、卡松粘度、血漿粘度、紅細(xì)胞變形指數(shù)、聚集指數(shù)、剛性指數(shù):(2)NO熒光探針:通過(guò)測(cè)定平均熒光強(qiáng)度(PKPosX)反應(yīng)紅細(xì)胞內(nèi)的一氧化氮水平。
　　結(jié)果:保存期內(nèi)對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組紅細(xì)胞變形指數(shù)、聚集指數(shù)和剛性指數(shù)均隨著時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸增高,且變化顯著。對(duì)照組高切相對(duì)粘度在存放1d后出現(xiàn)升高,隨后維持相同數(shù)值,遞增趨勢(shì)不明顯;低切粘度在3h—5d期間無(wú)顯著差異,14d-21d期間持續(xù)

5、升高;卡松粘度在(5d、7d、14d、21d)時(shí)間點(diǎn)呈逐漸升高的趨勢(shì)。當(dāng)NO前體濃度為5μM時(shí)能夠明顯改善保存14d內(nèi)的庫(kù)血紅細(xì)胞變形性指數(shù)和3d-7d內(nèi)的剛性指數(shù);NO前體濃度為10μM時(shí),能明顯改善保存3d-21d內(nèi)紅細(xì)胞變形性指數(shù),14d-21d內(nèi)的剛性指數(shù);不同濃度的NO對(duì)紅細(xì)胞聚集性指數(shù)均沒(méi)有影響。高于相應(yīng)的最佳NO濃度范圍的時(shí),紅細(xì)胞變形指數(shù)受損。
　　結(jié)論:懸浮紅細(xì)胞隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng),紅細(xì)胞變形能力會(huì)逐漸降低。NO