1、目的：研究青蒿琥酯(artesunate,Art)的體外抗癌作用，探討其分子作用機(jī)理，為其進(jìn)一步的開發(fā)利用提供實驗依據(jù)和理論基礎(chǔ)。 方法：抗癌活性方面：體外培養(yǎng)人腫瘤細(xì)胞，MTT比色法確定青蒿琥酯的抗瘤譜，并分別研究青蒿琥酯與抗癌藥5-FU聯(lián)用，與硫酸亞鐵聯(lián)用的抗癌效果。 作用機(jī)理方面：采用HOECHST熒光染色法、Annexin V和PI雙染流式細(xì)胞術(shù)研究青蒿琥酯的促凋亡作用、DNA ladder研究腫瘤細(xì)胞DNA的變

2、化、ELISA法研究酶caspase-3的活性的改變、免疫組化研究P53、bc1/bax基因的表達(dá)；細(xì)胞DNA染色流式細(xì)胞術(shù)研究青蒿琥酯對細(xì)胞周期的影響。 結(jié)果： ①青蒿琥酯抗瘤譜較廣，對人胃癌7901、肺癌A540、K562、A2780、HEPG．2、KBV200等腫瘤細(xì)胞的增殖有明顯抑制作用，其IC50值分別為(81.9±4.6)，(78.4±5.1)，(58.1±2.8)，(93.7±4.3)，(75.3±4.1)

3、，(113.3±7.2)μg/ml。 ②青蒿琥酯對人肝癌系細(xì)胞株HEPG-2作用24 h，48 h，72 h的IC50值分別為(103.1±8.6)，(75.3±4.1)，(65.7±6.0)μg/ml。 ③當(dāng)青蒿琥酯(10μg/mL、20μg/mL)與5-Fu(2.μg/mL、5.0μg/mL)聯(lián)合使用24小時和48小時對HEPG-2細(xì)胞抑制率可達(dá)到56.7％、67.1％，與5-Fu表現(xiàn)出協(xié)同作用。 ④通過添加

4、硫酸亞鐵，并未提高青蒿琥酯對HEPG-2的抑制率(P>0.05)。 ⑤熒光染色、流式、DNA ladder 結(jié)果顯示，青蒿琥酯 50、100、200μ/mL可以不同程度的誘導(dǎo)HEPG-2細(xì)胞凋亡。 ⑥青蒿琥酯作用HEPG-2細(xì)胞48小時后，細(xì)胞中caspase-3濃度高于對照組，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)：免疫組化結(jié)果顯示p53，blc-2/bax蛋白的表達(dá)發(fā)生明顯變化(P<0.05)。 ⑦細(xì)胞周期結(jié)果顯示

5、，青蒿琥酯處理組與對照組相比，周期分布發(fā)生明顯變化，將細(xì)胞周期阻滯于G2+M期，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論： ①青蒿琥酯抗瘤譜較廣，對多種腫瘤細(xì)胞有抑制作用；與傳統(tǒng)抗癌藥5-FU體外聯(lián)合使用，具有顯著的抗瘤效果；與鐵劑聯(lián)合應(yīng)用，并未提高青蒿琥酯對HEPG-2的抑制率。 ②青蒿琥酯可以促進(jìn)HEPG-2細(xì)胞凋亡，其機(jī)制可能是通過損傷細(xì)胞DNA，激活caspase-3，影響bcl/bax的表達(dá)，P53基因