1、背景：
　　越來(lái)越多的證據(jù)表明炎癥在冠心病(coronary heart disease, CHD)的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后過(guò)程中起很重要的作用。多種炎癥因子與冠心病的關(guān)系是冠心病研究領(lǐng)域的一個(gè)熱點(diǎn),揭示炎癥因子與冠心病的關(guān)系有重要臨床意義。多種炎癥因子(如C反應(yīng)蛋白、腫瘤壞死因子-α、白介素-6等)在冠心病中都有不同程度的合成增加。腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor–α, TNF-α)通過(guò)增加內(nèi)皮細(xì)胞的促凝活

2、性,促進(jìn)由活化白細(xì)胞介導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞的病理?yè)p傷和功能改變,引起炎癥及損傷;從而引起斑塊的穩(wěn)定性下降、斑塊破裂,導(dǎo)致急性冠脈綜合征(acute coronary syndrome, ACS)的發(fā)生。血管內(nèi)血栓形成是很多疾病共同的病理過(guò)程,它涉及了凝血與抗凝系統(tǒng)、纖溶系統(tǒng)間的動(dòng)態(tài)平衡。組織因子途徑在生理性止血與病理性血栓形成過(guò)程中具有極其重要的意義。組織因子途徑抑制物(tissue factor pathway inhibitor, TFPI

3、)是體內(nèi)的主要抗凝物質(zhì),分為組織因子途徑抑制物-1(TFPI-1)和組織因子途徑抑制物-2(TFPI-2)。本試驗(yàn)即是探討炎癥因子TNF-α對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVEC)表達(dá)組織因子途徑抑制物-2的影響及其通路。
　　目的：
　　觀察TNF-α(20ng/mL)、ERK抑制劑PD98059(10umol/L)、NF-κB抑制劑二硫代氨基甲酸吡咯

4、烷(pyrrolidine dithiocarbamate, PDTC)(50umol/L)處理后,人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞TFPI-2表達(dá)的變化,探討TNF-α對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)TFPI-2的合成和表達(dá)的調(diào)節(jié)機(jī)制,進(jìn)而探討其通路。
　　方法：
　　(1)體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞:人原代臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)及低血清培養(yǎng)基購(gòu)自美國(guó)Cascade Biologics公司。細(xì)胞復(fù)蘇后于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),經(jīng)傳代,凍存,所

5、用細(xì)胞為3-4代。
　　(2)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞分為單純培養(yǎng)基對(duì)照組、TNF-α組、PD組、PDTC組。TFPI-2蛋白測(cè)定采用Western blot法,TFPI-2 mRNA測(cè)定采用real time RT-PCR法。
　　結(jié)果：
　　(1)TNF-α可顯著上調(diào)TFPI-2蛋白的含量(P<0.01),ERK抑制劑PD、NF-κB抑制劑PDTC可使TFPI-2蛋白含量降低(P<0.05)。
　　(2)TNF-α可

6、顯著上調(diào)TFPI-2 mRNA的表達(dá)(P<0.01),ERK抑制劑PD、NF-κB抑制劑PDTC抑制TFPI-2 mRNA合成(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　(1)TNF-α可以明顯上調(diào)TFPI-2的表達(dá),對(duì)炎癥刺激促進(jìn)血栓形成有一定的保護(hù)作用;
　　(2)ERK抑制劑PD及NF-κB抑制劑PDTC均抑制TFPI-2合成,證實(shí)MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑(ERK)及核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB對(duì)TFPI-2的正向調(diào)節(jié)作用;