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文檔簡介
1、目的:通過觀察高溫氧化作用對人晶狀體上皮細胞內熱休克蛋白質(HSP)表達的影響,來探討白內障的發(fā)病機制,試圖證明HSP27、HSP70可能參與了對晶狀體的保護作用。 方法:人HLB-C3細胞系(由中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院的眼科學系提供)含15%的小牛血清在DMEM37℃培養(yǎng)箱里培育。培育后的晶狀體細胞分為對照組和兩個實驗組(Ⅰ、Ⅱ),實驗組Ⅰ在高溫(45℃)條件下培養(yǎng)30分鐘后,于不同時間段(0h,2h,4h,6h,16h,24
2、h)采用逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測HSP27mRNA、HSP70mRNA的水平,實驗組Ⅱ在氧化(50mmol/LH2O2)條件培養(yǎng)30分鐘后,恢復至正常條件下,在生物介質中恢復于不同時間段(0h,2h,4h,6h,16h,24h),采用逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測HSP27mRNA、HSP70mRNA的水平,對照組于不同時間段(0h,2h,4h,6h,16h,24h),采用逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測HS
3、P27mRNA、HSP70mRNA的水平,以β-actin作為內參校正,并對獲得的指標進行統計學分析。 結果:生理狀態(tài)下和高溫、氧化狀態(tài)下均有熱休克蛋白質的表達,高溫應激和氧化應激后2小時導致HSPmRNA的水平增加。統計分析發(fā)現HSP27、HSP70高溫組和氧化組的表達明顯高于對照組,有顯著性差異(p<0.05)。并且每組HSP27mRNA、HSP70mRNA的表達到達峰值的時間間隔從2h到6h不等。以后逐漸降低,但是他們全部
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