1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文肺癌細(xì)胞系中腫瘤干細(xì)胞樣細(xì)胞的分離鑒定和干性標(biāo)志的測(cè)定姓名：劉春齊申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：龍浩20090513中山大學(xué)碩士學(xué)位論文肺癌細(xì)胞系中腫瘤干細(xì)胞樣細(xì)胞的分離鑒定和干性標(biāo)志的測(cè)定細(xì)胞特性的差異，并比較它們的干細(xì)胞標(biāo)志CDl33和CD90表達(dá)的差異。方法：將生長(zhǎng)狀態(tài)良好的肺癌細(xì)胞A549、GLC82、SWl573和H460經(jīng)DNA熒光染料Hoechst33342染色后進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測(cè)，測(cè)定相應(yīng)的

2、SP細(xì)胞的比例；選取一株用流式細(xì)胞儀分選，收集熒光陽(yáng)性的nonSP細(xì)胞和熒光陰性的SP細(xì)胞，2％FBSDMEM培養(yǎng)過夜，過濾掉狀態(tài)不佳的細(xì)胞，第2天將SP細(xì)胞和nonSP細(xì)胞以不同的數(shù)目接種裸鼠觀察其成瘤性的差異；接種96孔板，每天用MTT法檢測(cè)生長(zhǎng)速度；接種6孔板，第8天檢測(cè)克隆形成能力的差異；在10％FBSDMEM中培養(yǎng)一周后測(cè)定SP細(xì)胞和nonSP細(xì)胞的比例，比較多向分化和自我更新能力的差異；用CDl33和CD90等單克隆抗體標(biāo)記

3、后檢測(cè)其相應(yīng)的蛋白在細(xì)胞表面表達(dá)的差異。結(jié)果：肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549、GLC一82、H460和SWl573中均有不同比例的SP細(xì)胞的存在，分別為：145％，85％，55％，O1l％，維托帕米(Vempamil)能夠有效的阻斷ABCG2的功能，以上細(xì)胞系經(jīng)過阻斷后SP細(xì)胞的比率依次為36％，17％，O15％和O0％；GLC82中的SP細(xì)胞具有很強(qiáng)的成瘤性，5103個(gè)SP細(xì)胞就可以成瘤，而105個(gè)nonSP細(xì)胞才可以成瘤，成瘤能力SP細(xì)胞是no

4、n—SP細(xì)胞的20倍左右；SP細(xì)胞具有很強(qiáng)的增殖能力，在相同的生長(zhǎng)環(huán)境中比nonSP細(xì)胞生長(zhǎng)迅速(Po05)；SP細(xì)胞比nonSP細(xì)胞具有較高的細(xì)胞克隆能力，克隆形成率(CFE)為550％士56％，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于non—SP細(xì)胞的198％士16％，po0l；SP細(xì)胞能夠分化出SP細(xì)胞和nonSP細(xì)胞，到第一周末SP細(xì)胞的比例由分選后當(dāng)天的98％降至356％，SP細(xì)胞的干性標(biāo)志CDl33、CD90的表達(dá)明顯高于nonSP細(xì)胞，(06％VS02％

5、，PO05：37％VS04％，pO01)。結(jié)論：肺癌細(xì)胞系(A549、GLC82、H460和SWl573)中均有SP細(xì)胞，GLC82比例最高，SWl573中幾乎沒有SP細(xì)胞，Verapamil可以有效的抑制SP細(xì)胞外排HoechSt33342；SP細(xì)胞具有無限增殖、自我更新能力、高克隆形成能力、多向分化潛能以及在小鼠體內(nèi)的強(qiáng)致瘤能力等腫瘤干細(xì)胞的特征；CD90和CDl33可能是肺癌細(xì)胞系GLC82中的干性標(biāo)志。關(guān)鍵詞：肺癌細(xì)胞，腫瘤干細(xì)