1、目的：檢測(cè)FOXM1(ForkheadboxM1)及MMP-9(matrixmetalloproteinases-9，MMP-9)在人膽囊癌組織中的表達(dá)情況；觀察FOXM1基因沉默對(duì)人膽囊癌細(xì)胞株NOZ生物學(xué)行為的影響，初步探討其在膽囊癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。
　　 方法：采用免疫組化法檢測(cè)51例膽囊癌及28例慢性膽囊炎(chroniccholecystitis，CC)組織中FOXM1和MMP-9的表達(dá)情況，并統(tǒng)計(jì)分析FOXM1、

2、MMP-9的表達(dá)相關(guān)性，以及其表達(dá)與膽囊癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系；RT-PCR檢測(cè)三株膽囊癌細(xì)胞株(GBC-SD、NOZ、SGC996)中FOXM1和MMP-9的表達(dá)情況，篩選出FOXM1和MMP-9均高表達(dá)的細(xì)胞株；針對(duì)FOXM1mRNA序列設(shè)計(jì)合成siRNA的DNA模板，構(gòu)建了4條PGPU6/GFP/Neo-FOXM1重組質(zhì)粒，篩選出最強(qiáng)干擾效率的一條，并轉(zhuǎn)染高表達(dá)FOXM1和MMP-9的膽囊癌細(xì)胞株NOZ；RT-PCR、Western

3、blot技術(shù)檢測(cè)FOXM1沉默對(duì)細(xì)胞內(nèi)源性FOXM1表達(dá)的影響，RT-PCR和免疫細(xì)胞組化技術(shù)檢測(cè)FOXM1沉默對(duì)NOZ細(xì)胞株內(nèi)源性MMP-9表達(dá)的影響；用MTT法檢測(cè)該細(xì)胞體外增殖活性的變化；用Transwell小室法檢測(cè)該細(xì)胞體外侵襲能力的改變。
　　 結(jié)果：FOXM1、MMP-9在膽囊癌組織中的陽(yáng)性率分別為52.9％和76.5％，而在慢性膽囊炎組織中的陽(yáng)性率分別為10.7％和7.1％，膽囊癌組織與慢性膽囊炎組織比較兩者均有

4、顯著性差異(P≤0.001)。FOXM1在膽囊癌組織中的表達(dá)與臨床分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P=0.007、0.008、0.019)，MMP-9在膽囊癌組織中的表達(dá)與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P=0.001、0.017)。FOXM1與MMP-9在癌組織中的表達(dá)有相關(guān)性(r=0.403，P=0.003)。RT-PCR結(jié)果顯示FOXM1、MMP-9在膽囊癌細(xì)胞株GBC-SD、NOZ、SGC996均高表達(dá)，表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05

5、)，選NOZ細(xì)胞株作為試驗(yàn)細(xì)胞株；PGPU6/GFP/Neo-FOXM1重組質(zhì)粒在mRNA及蛋白水平分別顯著抑制NOZ細(xì)胞FOXM1基因表達(dá)，抑制率分別最高達(dá)74.32％和82.18％，同時(shí)下調(diào)了MMP-9的表達(dá)；NOZ細(xì)胞增殖活性明顯下降；侵襲細(xì)胞數(shù)下降至(31.4±4.037)個(gè)。
　　 結(jié)論：FOXM1和MMP-9在人膽囊癌組織中呈高表達(dá)，并與膽囊癌的臨床病理參數(shù)密切相關(guān)，涉及膽囊癌的發(fā)生、發(fā)展；NOZ細(xì)胞FOXM1基因的