1、研究背景 血管性癡呆(VD)是老年期癡呆的主要類型之一。在我國，其患病率僅次于Alzheimer病，缺血性病變尤其多發(fā)性腦梗塞是VD的主要病理基礎，VD可由于主要腦動脈閉塞引起腦梗死，梗死腦組織容積超過80-150ml(包括多發(fā)性腦梗塞)臨床即可出現(xiàn)癡呆，額葉、顳葉及邊緣系統(tǒng)等部位血管源性病變更易導致癡呆。資料顯示60歲以上缺血性卒中患者3個月后癡呆發(fā)生率較正常人群增高9倍。腔隙性腦梗死患者有83％出現(xiàn)認知和行為功能減退，相對一

2、般人群中認知功能障礙的發(fā)生率為5.3％，增加了15.7倍。另外，國內(nèi)外已有大量實驗證實，慢性腦缺血會引起實驗動物的學習記憶等行為學及海馬病理等改變：雙側頸總動脈結扎術后30d，海馬錐體細胞密度減低，術后60d，核固縮深染，海馬錐體細胞密度顯著減低。雙側頸總動脈結扎大鼠存活30d時，經(jīng)水迷宮測試出現(xiàn)明顯的學習記憶障礙；60d后，學習記憶能力仍然降低，沒有恢復的趨勢。另有研究顯示頸動脈狹窄造成的腦血流慢性失代償或腦結構損害可引起認知障礙，對

3、嚴重頸動脈狹窄患者行頸動脈內(nèi)膜剝脫術后，其認知功能有所恢復。VD的發(fā)病機制一直在不斷的探索中。多項研究證明成年個體需要中、高水平的循環(huán)甲狀腺激素水平來維持其最佳腦功能狀態(tài)。在正常成年人血清中T4濃度是T3濃度的近50倍，而腦中T3濃度卻與T4濃度基本相平。同樣老年人的腦比外周組織需要更多的T4以完成其代謝。有學者研究正常甲狀腺功能的老年病人其認知功能變化與甲狀腺激素水平的關系，發(fā)現(xiàn)血清低T4水平者認知功能下降的可能性為相對高T4水平者的

4、雙倍；老年甲狀腺功能減退患者往往伴有認知功能障礙，用外源性甲狀腺激素替代治療后，其甲狀腺功能及認知功能均得到改善。最近一項研究證實亞臨床甲減患者經(jīng)甲狀腺激素替代治療后其韋氏記憶量表測評分值有明顯增高；成年甲減時大鼠海馬LTP產(chǎn)生不能，以及大鼠和人學習和記憶損害。進一步研究發(fā)現(xiàn)TH通過對NRl和NR2BmRNA表達的調(diào)節(jié)影響LTP的產(chǎn)生，進而影響認知功能；可以認為認知功能障礙的發(fā)生與甲狀腺激素代謝紊亂有一定聯(lián)系。測定腦梗塞患者腦脊液TH發(fā)

5、現(xiàn)：CSFFT3、FT4均顯著下降，臨床研究發(fā)現(xiàn)VD患者存在血清甲狀腺激素水平異常，主要表現(xiàn)為低T3綜合征，且其變化與癡呆程度密切相關。本實驗通過永久性結扎雙側頸總動脈建立大鼠慢性腦供血不足模型，研究慢性腦缺血大鼠腦組織甲狀腺激素代謝變化特點，為系統(tǒng)性研究慢性腦缺血大鼠認知功能改變與甲狀腺激素系統(tǒng)變化的關系提供實驗支持，為臨床VD的治療提供新的思路。 研究方法 第一部分慢性腦缺血大鼠認知功能行為測試 一.實驗分組

6、：37只雄性成年SD大鼠隨機分四組：假手術組；單純手術組(永久性結扎雙側頸總動脈5周)；術后給藥組(雙側頸總動脈結扎后次日給予甲狀腺素20mg/日/只灌胃共5周)；甲狀腺機能減低組(含0.15％PTU的低碘飼料喂養(yǎng)8周)。 二.Morris水迷宮測試：各組均于實驗終點進行定位航行試驗、空間探索試驗及工作記憶測試。 三.統(tǒng)計方法：實驗數(shù)據(jù)以均值±標準誤表示，采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件中的隨機方差分析(one-wayANO

7、VA)進行統(tǒng)計學分析，比較各組之間相關測試指標差異。 第二部分慢性腦缺血大鼠腦組織甲狀腺激素代謝變化 一.實驗分組：假手術組8只，單純手術組6只，術后給藥組6只，甲減組8只。 二.放射免疫法測定腦組織T3、T4、rT3 1.腦勻漿的制備：于實驗終點大鼠斷頭取腦，除去表面腦膜及血管，稱重，按1∶2比例與PB混合，冰水浴中剪碎，于預冷的勻漿器中5分種內(nèi)制成組織勻漿。 2.腦組織T3、T4、rT3的提取

8、及純化：取0.4G腦組織勻漿按比例加入95％乙醇，振搖，4℃靜置，離心取上清，室溫下經(jīng)AmberliteCG-400層析柱，通過醋酸鹽緩沖液的PH梯度、醋酸的濃度梯度，與乙醇的交互作用凈化提純腦組織中的T3、T4、rT3。 3.放射免疫法測定腦組織T3、T4、rT3：按照試劑盒說明操作，以125I多探頭γ計數(shù)器分別測各管放射性計數(shù)，并進行數(shù)據(jù)處理。 三.放射免疫法測定腦組織T4-5'-脫碘酶活性 腦組織勻漿離心取

9、上清，分為測試管與對照管各400μL，各加入磷酸鹽緩沖液500μL，前者加入L-T4并放入37℃恒溫箱120分鐘充分作用，后者為放入恒溫箱作用后再加入L-T4,95％乙醇2ml中止反應，離心取上清，放射免疫法分別測定T3。并按公式：T4-5'-脫碘酶活性=(測試管T3量nmol/1-對照管T3量nmol/1)×3×650.97×0.769，計算脫碘酶活性。(3為測試管和對照管容積3ml，650.97為T3分子量，0.769為1/0.13

10、×5×2，其中0.13為組織量(g-eq)，5為加入的T4量(μg)，2為作用時間。) 四.統(tǒng)計方法：實驗數(shù)據(jù)以均值±標準誤表示，采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件中的隨機方差分析(one-wayANOVA)進行統(tǒng)計學分析，進一步分析采用LSD法，檢驗水準α=0.05，比較各組之間相關測試指標差異。 研究結果 第一部分行為學測試 一.定位航行試驗：假手術組6.19±3.90，甲減組9.70±4.87，單純手術組

11、57.87±57.48，術后給藥組16.13±19.50；單純手術組之潛伏期較其它各組明顯延長，差異具有顯著性(p＜0.05)，其余各組之間無明顯差異。 二.空間探索試驗：假手術組32.18±7.17，甲減組29.60±4.13，單純手術組18.50±3.05，術后給藥組20.58±7.99；甲減組與假手術組之間無顯著性差異，單純手術組和術后給藥組之間亦無顯著性差異，而其余各組之間差異具有顯著性(p＜0.05)。 三.工

12、作記憶：假手術組5.78±3.27，甲減組8.43±4.52，單純手術組62.84±50.26，術后給藥組12.65±12.79；假手術組、甲減組和術后給藥組之間無顯著性差異，單純手術組成績較其余各組差，差異具有顯著性(p＜0.05)。 第二部分腦組織甲狀腺激素代謝變化 一.腦組織T3測定結果： 甲減組：5.81±0.40，術后給藥組：7.37±1.39，單純手術組：5.32±0.74，假手術組：9.92±1.9

13、9。方差分析顯示：單純手術組較假手術組顯著下降(P＜0.01)，與甲減組無明顯差異；術后給藥組較單純手術組明顯增高(P＜0.01)，但與假手術組之間仍有顯著差異(P＜0.01)， 二.腦組織T4測定結果： 甲減組：17.35±3.00，術后給藥組：23.56±4.85，單純手術組：17.08±0.36，假手術組：26.34±3.20。方差分析顯示：單純手術組與假手術組相比呈顯著性下降(P＜0.01)，但與甲減組比較無明顯

14、差異；術后給藥組較單純手術組明顯升高(P＜0.01)，較假手術組稍低，兩者比較其差異無統(tǒng)計學意義。 三.腦組織rT3測定結果： 甲減組：2.87±0.33，術后給藥組：2.20±0.23，單純手術組：2.65±0.19，假手術組：2.16±0.27。方差分析顯示：單純手術組與假手術組相比明顯升高(P＜0.01)，較甲減組低，但兩者相比其差異無統(tǒng)計學意義；術后給藥組較單純手術組下降(P＜0.01)，而與假手術組比較無統(tǒng)計學

15、差異。 四.腦組織T4-5'-脫碘酶測定結果： 甲減組：3.83±1.43，術后給藥組：1.93±0.29，單純手術組：1.63±0.88，假手術組：3.11±0.88。方差分析顯示：術后給藥組、單純手術組均與假手術組有顯著性差異(P＜0.05)；術后給藥組脫碘酶活性較單純手術組有所增加，但無顯著性差異；甲減組與假手術組比較其差異無統(tǒng)計學意義。 研究結論 一.慢性腦缺血導致大鼠對空間的學習記憶能力全面受損

16、。 二.慢性腦缺血時，大鼠T4-5'-脫碘酶活性明顯受損。 三.慢性腦缺血時，大鼠腦組織T3、T4、rT3濃度明顯變化并有其特點，隨著補充甲狀腺激素，大鼠的學習記憶能力明顯提高，同時腦組織甲狀腺激素濃度有恢復正常趨勢，提示慢性腦缺血大鼠認知功能損傷與其腦實質損傷致甲狀腺激素水平異常有關。 四.慢性腦缺血大鼠與甲狀腺功能正常病態(tài)綜合征、甲狀腺功能減低引起的甲狀腺激素代謝變化不同。后兩者腦內(nèi)甲狀腺激素的變化為代償性，