1、本文主要從以下幾個(gè)方面進(jìn)行論述：
　　第一部分 載STAT3誘騙寡核苷酸陽(yáng)離子固體脂質(zhì)納米粒的制備及表征
　　目的:
　　1.制備空白陽(yáng)離子固體脂質(zhì)納米粒(SLN)并檢測(cè)其粒徑、表面電位、穩(wěn)定性等特征。
　　2.探討SLN對(duì)卵巢癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性。
　　3.制備載STAT3誘騙寡核苷酸陽(yáng)離子固體脂體納米粒(SLN-STAT3 decoy ODN)。檢測(cè)其粒徑、表面電位等特征。
　　方法:
　　1.

2、采用單硬脂酸甘油酯和卵磷脂為脂質(zhì)材料，以十六烷基三甲基溴化銨（CTAB）為表面活性劑，采用溶劑擴(kuò)散法制備空白SLN。
　　2.將制備的SLN與適當(dāng)比例的STAT3 decoy ODN復(fù)合，制備SLN-STAT3 decoyODN，采用瓊脂糖凝膠阻滯分析法驗(yàn)證SLN-STAT3 decoy ODN的形成。
　　3.采用透射電鏡觀察SLN和SLN-STAT3 decoy ODN的形態(tài)特征，采用DelsaTMNano粒度測(cè)定儀測(cè)定

3、其粒徑和表面電位。
　　4.采用MTT法檢測(cè)SLN對(duì)卵巢癌細(xì)胞系SKOV3和A2780的細(xì)胞毒性。
　　結(jié)論:
　　1.成功制備了SLN載體體系和SLN-STAT3 decoy ODN復(fù)合物。
　　2.SLN生物安全性好，對(duì)卵巢癌細(xì)胞SKOV3和A2780無(wú)明顯的細(xì)胞毒性。
　　第二部分 SLN-STAT3 decoy ODN復(fù)合物靶向阻斷STAT3對(duì)人卵巢癌細(xì)胞體外抑制作用及機(jī)制研究
　　目的:

4、r>　　1.檢測(cè)卵巢癌細(xì)胞對(duì)SLN-STAT3 decoy ODN的攝取能力。
　　2.檢測(cè)SLN-STAT3 decoy ODN在體外對(duì)卵巢癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用。
　　3.探討SLN-STAT3 decoy ODN在體外對(duì)卵巢癌細(xì)胞凋亡、自噬和侵襲遷移能力的影響。
　　方法:
　　1.應(yīng)用SLN-STAT3 decoy ODN轉(zhuǎn)染卵巢癌細(xì)胞SKOV3和A2780，采用熒光顯微鏡及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)FITC標(biāo)記的SL

5、N-STAT3 decoy ODN在卵巢癌細(xì)胞中的細(xì)胞攝取情況，Western blot法檢測(cè)STAT3，p-STAT3蛋白的表達(dá)情況。采用商品化的LipofectamineTM2000(Lipo)介導(dǎo)STAT3 decoy ODN的轉(zhuǎn)染作為陽(yáng)性對(duì)照。
　　2.MTT法檢測(cè)SLN-STAT3 decoy ODN(0，12.5，25，50nmol/L)轉(zhuǎn)染卵巢癌細(xì)胞SKOV3和A2780后不同時(shí)間(24h，48h，72h)的細(xì)胞存活

6、率。檢測(cè)轉(zhuǎn)染48h后，不同處理組(NC，SLN，SLN-STAT3 decoy ODN，Lipo-STAT3 decoy ODN，naked STAT3 decoy ODN，SLN-STAT3 scrambled ODN，Lipo)的細(xì)胞存活率。
　　3.AnnexinⅤ-FITC/PI雙染色法檢測(cè)SLN-STAT3 decoy ODN對(duì)卵巢癌細(xì)胞凋亡的影響;Western blot法檢測(cè)SLN-STAT3 decoy ODN對(duì)卵

7、巢癌細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。
　　4.透射電鏡下觀察SLN-STAT3 decoy ODN轉(zhuǎn)染卵巢癌細(xì)胞后細(xì)胞內(nèi)自噬體及自噬溶酶體的形態(tài)。吖啶橙染色檢測(cè)SLN-STAT3 decoy ODN對(duì)卵巢癌細(xì)胞自噬水平的影響。Western blot法檢測(cè)SLN-STAT3 decoy ODN對(duì)卵巢癌細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。
　　5.采用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)SLN-STAT3 decoy ODN對(duì)卵巢癌細(xì)胞遷移能力的影響。采用T

8、ranswell侵襲小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)SLN-STAT3 decoy ODN對(duì)卵巢癌細(xì)胞侵襲能力的影響。Western blot法檢測(cè)SLN-STAT3 decoy ODN對(duì)卵巢癌細(xì)胞侵襲遷移相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。
　　結(jié)論:
　　1.SLN-STAT3 decoy ODN能夠被卵巢癌細(xì)胞SKOV3和A2780高效攝取。
　　2.SLN-STAT3 decoy ODN能夠抑制卵巢癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞發(fā)生凋亡和自噬性細(xì)胞

9、死亡，抑制卵巢癌細(xì)胞的侵襲和遷移能力。
　　3.SLN-STAT3 decoy ODN有望成為卵巢癌基因治療的新策略。
　　第三部分 SLN-STAT3 decoy ODN復(fù)合物靶向阻斷STAT3對(duì)人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的治療作用及機(jī)制研究
　　目的:
　　1.建立人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型，探討SLN-STAT3 decoy ODN對(duì)荷瘤裸鼠的體內(nèi)抗瘤效應(yīng)。
　　2.探討SLN-STAT3 decoy O

10、DN體內(nèi)抗瘤效應(yīng)的機(jī)制。
　　3.探討SLN-STAT3 decoy ODN在裸鼠體內(nèi)應(yīng)用的安全性。
　　方法:
　　1.采用皮下注射法將人卵巢癌細(xì)胞SKOV3接種到裸鼠右側(cè)肩部皮下，建立裸鼠卵巢癌移植瘤模型。
　　2.接種后第14天，可觸及裸鼠皮下腫瘤結(jié)節(jié)時(shí)，將裸鼠隨機(jī)分為四組，每組5只，分別給予PBS，SLN-STAT3 scrambled ODN，naked STAT3 decoy ODN和 SLN-STA

11、T3 decoy ODN隔日進(jìn)行瘤內(nèi)多點(diǎn)注射，連續(xù)處理30天。每4日測(cè)量腫瘤體積。
　　3.治療結(jié)束后，取裸鼠腫瘤組織、心臟、肝臟及腎臟，制作石蠟切片，行HE染色，顯微鏡下觀察。取裸鼠血液，檢測(cè)SLN-STAT3 decoy ODN對(duì)血常規(guī)，肝腎功能的影響。
　　4.TUNEL法檢測(cè)SLN-STAT3 decoy ODN在裸鼠體內(nèi)對(duì)卵巢癌細(xì)胞凋亡的影響。
　　5.透射電鏡下觀察裸鼠腫瘤組織的超微結(jié)構(gòu)。
　　6.W

12、estern blot法檢測(cè)SLN-STAT3 decoy ODN對(duì)裸鼠腫瘤組織中凋亡、自噬和侵襲相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。
　　結(jié)論:
　　1.SLN-STAT3 decoy ODN對(duì)人卵巢癌裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)有抑制作用。
　　2.SLN-STAT3 decoy ODN可以在裸鼠體內(nèi)誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞的凋亡和自噬性細(xì)胞死亡，抑制腫瘤組織的侵襲轉(zhuǎn)移。
　　3.SLN-STAT3 decoy ODN在裸鼠體內(nèi)無(wú)明顯的骨髓抑制作