1、研究目的：探討慢性腦缺血大鼠的空間記憶能力和額葉皮質、海馬區(qū)自由基(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、轉化生長因子β1 (TGF-β1)、Bcl-2 因子陽性表達的動態(tài)變化及相互關系，藥物依達拉奉對慢性缺血鼠認知功能障礙與 TGF-β1、Bcl-2、SOD、MDA 陽性表達影響的研究。實驗過程中依達拉奉、腦蛋白水解物腹腔注射，觀察治療后大鼠記憶能力及自由基(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、與轉化生長因子β1(TGF-β1)、Bcl

2、-2 因子表達的變化規(guī)律，為臨床尋找抗自由基和提高缺血后學習記憶能力，防治血管性癡呆藥物提供理論依據(jù)。 方法：選取健康雄性 Wistar 大鼠，采取永久性結扎大鼠雙側頸總動脈的方法，制備與人類慢性腦缺血比較相似的慢性腦缺血大鼠模型。術后3周開始給予依達拉奉(10mg/kg) 或腦蛋白水解物注射液(5ml/kg)腹腔注射，每天一次，直至處死。手術后1、3、7、14、21、28天分別對術后大鼠進行卒中指數(shù)、神經病學癥狀評定。手術后2

3、周、4周、8周、12周、16周應用Y迷宮檢測各組大鼠的空間辨別記憶能力。采用HE染色，光鏡觀察各組大鼠腦組織的形態(tài)學變化情況；應用免疫組織化學方法檢測大鼠額葉皮質及海馬區(qū)轉化生長因子β1(TGF-β1)、Bcl-2凋亡因子表達的動態(tài)變化；應用光化學比色法測定自由基(MDA)超氧化物歧化酶(SOD)的變化。應用SPSS12.0 軟件進行統(tǒng)計學分析，首先進行正態(tài)分布及方差齊性檢驗，各組間比較用單因素方差分析，兩兩比較應用q檢驗。 結

4、果： 1、慢性前腦缺血鼠認知功能改變雙側頸總動脈結扎后3天，卒中指數(shù)與神經病學指數(shù)兩項指標均接近正常，無運動障礙。采用Y迷宮檢測各組大鼠術后空間記憶能力，結果如下：術后2周大鼠記憶功能下降，個體差異很大，部分大鼠的Y迷宮正確次數(shù)明顯減少；缺血4周時大鼠記憶能力比對照組明顯下降，差異顯著 P<0.01。 以后Y迷宮正確次數(shù)逐漸減少，缺血4個月時與對照組比較下降最明顯。依達拉奉組、腦蛋白水解物組分別在各時間點Y迷宮正確次數(shù)明

5、顯增加，與缺血組比較差異具有顯著性意義，P<0.01，依達拉奉組Y迷宮正確次數(shù)較腦蛋白水解物組明顯增加，差異具有顯著性意義，P<0.01。 2、組織病理學改變：對照組大鼠皮質、海馬區(qū)神經細胞形態(tài)及分布正常。缺血組大鼠缺血4周，2只大鼠尾狀核、額葉皮質和胼胝體區(qū)出現(xiàn)梗塞灶。額葉皮質和海馬區(qū)神經細胞變性、壞死、脫失、膠質細胞增生。缺血8周以后未見明顯梗塞灶，皮質及海馬區(qū)可見變性壞死的神經細胞逐漸減少，但細胞脫失逐漸加重，腦室擴張，

6、皮質萎縮變薄。依達拉奉組及腦蛋白水解物組大鼠額葉皮質及海馬區(qū)神經細胞變性、壞死、脫失及膠質細胞增生均較缺血組減輕。 3、額葉皮質與海馬區(qū)自由基(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)與轉化生長因子β1(TGF-β1)、Bcl-2抑凋亡因子的表達： 對照組額葉皮質與海馬區(qū)均有微弱 TGF-β1表達，說明內源性 TGF-β1表達水平很低。TGF-β1 表達在慢性腦缺血損傷中呈現(xiàn)一動態(tài)變化過程，且不同部位的表達存在差異。慢性腦缺血

7、后，TGF-β1的表達主要集中在皮質及海馬內，表達細胞是膠質細胞與錐體細胞，還有極少數(shù)巨噬細胞。慢性腦缺血4周之內達高峰，以后隨著缺血時間的延長逐漸下降。缺血組缺血12周時在額葉皮質區(qū)TGF-β1表達高于對照組，P<0.05；缺血組缺血8周時在海馬區(qū)TGF-β1表達高于對照組，P<0.05。依達拉奉及腦蛋白水解物組TGF-β1表達分別與對照組、缺血組各時間點比較在額葉皮質及海馬區(qū)表達明顯增高，且具有統(tǒng)計學意義，P<0.01。在各時間點各

8、區(qū)，依達拉奉組TGF-β1表達高于腦蛋白水解物組，差異有顯著性，P<0.01 (缺血4、8周)，P<0.05 (缺血 12、16周)。 對照組額葉皮質及海馬區(qū)有少量Bcl-2 陽性細胞表達。缺血組與用藥組Bcl-2高峰表達均在缺血4周內，以后逐漸下降，到12周時缺血組與對照組相比額葉皮質Bcl-2表達仍高于對照組，差異顯著，P<0.05。缺血4周時海馬區(qū)Bcl-2表達明顯高于對照組P<0.01，缺血4周后Bcl-2表達下降，缺血

9、8周時海馬區(qū)與對照組比較Bcl-2表達無顯著差異，P>0.05。腦蛋白水解物與依達拉奉組，分別與對照組、缺血組各時間點比較額葉皮質及海馬區(qū)Bcl-2表達均明顯增高，差異有顯著性，P<0.01。依達拉奉組額葉皮質及海馬區(qū)Bcl-2表達在各時間點均高于腦蛋白水解物組，差異有顯著性，P<0.01 (缺血4、8周)，P<0.05(缺血12、16周)。 對照組額葉皮質與海馬區(qū)均有少量MDA表達。缺血組及藥物組缺血4周MDA表達均明顯增高，

10、呈一高峰狀態(tài)，以后逐漸下降。各組缺血12周時表達基本恢復正常，各組差異無統(tǒng)計學意義。缺血組缺血8周時額葉皮質及海馬區(qū)MDA的表達仍明顯高于對照組，有顯著差異，P<0.01，而依達拉奉組和腦蛋白水解物組8周時額葉皮質及海馬區(qū)MDA的表達也高于對照組，P<0.05。依達拉奉組和腦蛋白水解物組8周時額葉皮質及海馬區(qū) MDA 的表達明顯低于缺血組，有顯著差異，P<0.01。依達拉奉組額葉皮質與海馬區(qū)MDA表達明顯低于腦蛋白水解物組，差異有顯著性

11、P<0.01(缺血 4周)，P<0.05(缺血8周)。 對照組額葉皮質與海馬區(qū)SOD表達星陽性。缺血組和藥物組缺血4周SOD表達明顯減少，呈一低峰，以后逐漸增加。各組缺血16周時SOD表達基本恢復正常，與對照組相比無明顯降低，統(tǒng)計學無意義。缺血組缺血12周額葉皮質及海馬區(qū)SOD表達仍明顯低于對照組，有顯著差異，P<0.01。依達拉奉組缺血8周額葉皮質及海馬區(qū)SOD 表達低于對照組，P<0.01。腦蛋白水解物組缺血12周額葉皮質及

12、海馬區(qū)SOD表達仍低于對照組，P(0.05。依達拉奉組和腦蛋白水解物組與缺血組比較，缺血 12周時各區(qū)SOD表達均高于缺血組，差異顯著，P<0.01。依達拉奉組缺血8周、12周時額葉皮質及海馬區(qū)SOD表達均高于腦蛋白水解物組，差異有顯著性，P<0.01( 缺血8周)，P<0.05(缺血12周)。 結論： 1、雙側頸總動脈永久結扎的慢性腦缺血鼠隨缺血時間延長出現(xiàn)認知功能進行性減退。 2、雙側頸總動脈永久結扎可引起實

13、驗大鼠額葉皮質錐體細胞進行性脫失伴膠質細胞增生，海馬區(qū)錐體細胞嚴重脫失伴基質疏松、微空泡形成。 3、雙側頸總動脈永久結扎的慢性腦缺血鼠SOD值明顯降低，MDA值明顯增加，TGF-β1、Bcl-2 值明顯增加。四種因子不僅參與慢性腦缺血大鼠細胞凋亡，在遲發(fā)性神經元壞死損傷中也起一定的作用。其中通過促進Bcl-2的表達而抑制神經元的凋亡是細胞因子發(fā)揮抗腦缺血作用的重要途徑。 4、依達拉奉及腦蛋白水解物均有改善慢性腦缺血大鼠的