1、家蠶核型多角體病毒（BmNPV）病是對蠶業(yè)生產(chǎn)危害最為嚴重的一類傳染性疾病，每年由此病給蠶繭造成的損失，大約占蠶病損失的70％左右。但是到目前為止，家蠶抗BmNPV病作用機制仍不明晰。本研究利用本課題組育成的對BmNPV高度抗性的品種為素材，對其經(jīng)BmNPV侵染后進行組織形態(tài)學和組織切片觀察，并利用RNA-seq技術對抗性素材和常規(guī)品種的脂肪體組織進行轉錄組分析，獲得可能涉及抗性機制的差異基因，同時，篩選出一段長1512bp的cDNA序

2、列，屬于家蠶海藻糖輔酶基因家族。熒光定量PCR檢測該基因在抗性品種秋豐N脂肪體和中腸組織中表達水平明顯上調，初步推測家蠶海藻糖輔酶與家蠶對BmNPV的抗性存在一定關聯(lián)。
　　主要研究結果如下：
　　1、家蠶組織形態(tài)學觀察和組織切片觀察
　　為探究BmNPV侵染家蠶后其組織在形態(tài)學上的變化，選用抗性品種秋豐N和常規(guī)品種秋豐兩個家蠶品種進行試驗。結果顯示：家蠶經(jīng)口添 BmNPV60h后常規(guī)品種秋豐血液與抗性品種秋豐N相比，

3、開始出現(xiàn)渾濁狀，說明病毒增殖顯著。中腸組織在添食60h左右與對照組比起來顏色略深，在84h之后出現(xiàn)糜爛、萎縮的狀態(tài)。經(jīng)皮下穿刺BmNPV48h左右家蠶血液與對照組比開始出現(xiàn)渾濁狀，在60h渾濁比較明顯說明病毒增殖接近平臺期，中腸組織在72h左右與對照組比較開始出現(xiàn)泛黃、糜爛，在96h之后萎縮發(fā)黑，而抗性品種秋豐N，各相對應時間點均未觀察到明顯的病變，無論中腸、血液，形態(tài)觀察良好，沒有出現(xiàn)BmNPV侵染后在常規(guī)素材中的性狀。推測抗性品種中

4、存在的某種抗性或清除機制導致了抗性品種對BmNPV的高度抵抗性。
　　2、BmNPV侵染家蠶抗性和非抗性品種后脂肪體組織的轉錄組分析
　　利用RNA-Seq技術對秋豐和秋豐N轉錄組數(shù)據(jù)進行分析。從2個獲得的文庫中獲得14.78Gb高質量數(shù)據(jù)（在秋豐和秋豐 N中分別超7.15Gb）。與參考基因組（www.silkdb.org）比對，在家蠶秋豐品種中共檢測到78408個SNPs，在秋豐N品種中檢測到56786個SNPs。同時，在

5、2個品種中均發(fā)現(xiàn)特異RNA選擇性剪接事件。BmNPV侵染48h后，秋豐N與秋豐品種比起來脂肪體有1728個差異表達基因（242個表達上調和1540個表達下調）。GO分類分析表明這些差異表達基因主要與細胞膜、新陳代謝、細胞結合和催化活性、細胞組分等過程相關。KEGG注釋通路分析表明，在氧化磷酸化、吞噬體、三羧酸循環(huán)、精氨酸、脯氨酸代謝丙酮酸代謝過程中，發(fā)現(xiàn)較高水平的基因表達。同時，COG分析表明差異表達基因涉及到“氨基酸運輸和代謝”和“信

6、號轉導機制”。
　　在一些功能分類中我們鑒定出了大量的差異表達基因，這表明家蠶在被感染后出現(xiàn)一系列主要的病理變化和一些與抗病機制有關的功能。氧化應激可能與家蠶抗BmNPV感染相關。另外，諸如氧化磷酸化等許多代謝活動都對家蠶抗性機制起到作用。此外，需要了解這些單一通路差異表達基因的生理功能對進一步研究其特性以及確定其在免疫過程中所起的作用。這些發(fā)現(xiàn)提供了新的研究方向，將在分子水平加深我們對病毒抗性機制的認識。
　　3、家蠶抗B

7、mNPV抗性基因的篩選
　　用抗性品種秋豐N和常規(guī)品種秋豐的中腸和脂肪體組織，克隆了一條長為1512bp的cDNA序列，比對之后發(fā)現(xiàn)其屬于家蠶海藻糖輔酶基因家族的tret基因，該基因共編碼504個氨基酸。該基因編碼的蛋白質質量為120.456KD,等電點為7.89。熒光定量PCR檢測該基因在抗性家蠶幼蟲的脂肪體、中腸、血液中均有表達。在幼蟲的各個組織中，以中腸和血液中的表達量最高，脂肪體次之。研究結果顯示，家蠶幼蟲被BmNPV感染