1、凝血酶(Thrombin)在止血與血栓形成、炎癥反應、胚胎發(fā)生、血管形成等生理及病理過程中發(fā)揮著重要作用。同時也是腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的重要因子。本實驗室前期的研究結果顯示,凝血酶可以促進肺癌細胞移植瘤裸鼠的腫瘤生長和轉移,縮短荷瘤裸鼠的生存期,發(fā)現(xiàn)凝血酶可明顯下調抑癌基因第10號染色體上缺失的與張力蛋白同源的磷酸酶(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome10,PTEN

2、)的表達。PTEN基因是一個具有雙特異磷酸酶活性(蛋白磷酸酶和脂質磷酸酶)的抑癌基因,可以促進腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉移等。本研究主要探討了PTEN調控的凝血酶體外促進肺癌細胞Glc-82生長轉移機制。
　　為證明凝血酶在體外促進肺癌細胞Glc-82增殖、細胞周期進程、抑制細胞凋亡及可能的作用機制。我們采用細胞計數(shù)試劑盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)法檢測凝血酶對 Glc-82細胞增殖活性的影響,確定其量

3、效和時效關系;利用碘化丙錠(propidium iodide, PI)單染和AnnexinV-APC/PI雙染用流式細胞儀檢測細胞周期和凋亡;以熒光實時定量 PCR檢測PTEN mRNA水平的變化,免疫印記法檢測PTEN、Skp2、p27kip1、p21WAF1表達和AKT磷酸化水平的變化。結果表明凝血酶(0.5U/ml和1.0U/ml)可以有效促進細胞的增殖(p<0.01),抑制細胞凋亡。凝血酶(0.5U/ml)可以促進Glc-82細

4、胞由G1期向S期轉化,抑制PTEN、p27kip1、p21WAF1的表達水平,提高Skp2的表達水平,提高AKT磷酸化水平。
　　凝血酶可以促進肺癌細胞Glc-82周期進程,促進細胞增殖,抑制細胞凋亡。為了進一步證實 PTEN是否參與調控凝血酶體外促進肺癌細胞Glc-82生長轉移機制。我們觀察了凝血酶對PTEN-shRNA干涉后Glc-82細胞周期、凋亡、遷移的影響及可能的作用機制。研究結果表明PTEN參與了凝血酶促進Glc-82