1、目的： 本實驗采用剛地弓形蟲RH強毒株速殖子感染BALB/c雄性小鼠，建立雄性生殖毒性的小鼠模型，采用RNA原位雜交法檢測蟲體能否侵入小鼠睪丸及附睪；利用透射電鏡觀察弓形蟲感染后小鼠睪丸組織超微結(jié)構(gòu)的改變；采用單細胞凝膠電泳檢測弓形蟲感染是否導致小鼠睪丸細胞DNA損傷；采用分光光度法檢測弓形蟲感染對小鼠血清及睪丸組織氧自由基水平的影響，探討弓形蟲致小鼠睪丸細胞損傷的作用。 方法： 1.將20只BALB/c雄性小鼠

2、隨機分為感染組(16只)和正常對照組(4只)，其中感染組小鼠腹腔注射弓形蟲速殖子2.5×103個/0.2 ml/只，正常對照組腹腔注射無菌PBS(0.01mol/L，pH=7.4)0.2ml/只，于攻蟲第1，3，5，7天分別處死感染組小鼠4只和正常對照組1只，取睪丸及附睪，4％多聚甲醛固定，石蠟包埋，切片(7μm)，采用RNA原位雜交法檢測蟲體能否侵入小鼠睪丸及附睪組織。 2.將10只BALB/c雄性小鼠隨機分2組，每組5只。正

3、常對照組腹腔注射無菌PBS 0.2ml/只；感染組腹腔注射純化的弓形蟲速殖子2.5×103個/0.2ml/只。感染7天后處死各組小鼠，取睪丸組織1mm3，2.5％的戊二醛固定，切片，應用透射電鏡觀察睪丸組織超微結(jié)構(gòu)的改變。 3.將20只BALB/c雄性小鼠隨機分4組(C、G1～3)，每組5只。C組為正常對照組，腹腔注射無菌PBS 0.2ml/只；G1～G3組為感染組，腹腔注射純化的弓形蟲速殖子：G1組注射2.5×103個/0.2

4、ml/只，G2組注射5×103個/0.2ml/只，G3組注射1×104個/0.2ml/只。感染7天后處死各組小鼠，將睪丸勻漿為細胞懸液，采用單細胞凝膠電泳檢測睪丸細胞內(nèi)DNA的損傷情況。 4.將25只BALB/c雄性小鼠隨機分為感染組(20只)和正常對照組(5只)，正常對照組腹腔注射無菌PBS 0.2ml/只；感染組腹腔注射弓形蟲速殖子2.5×103個/0.2ml/只。于攻蟲第1，3，5，7天分別摘眼球取血、離心收集血清，用于測

5、定小鼠血清氧自由基；分別取睪丸，勻漿、離心，取上清測定睪丸組織氧自由基水平。 結(jié)果： 1.RNA原位雜交于感染后第3天在小鼠睪丸及附睪內(nèi)檢測到弓形蟲速殖子；感染后第5天和7天睪丸組織內(nèi)弓形蟲速殖子明顯增多，且有假包囊形成。蟲體主要位于生精小管的生精上皮內(nèi)(精原細胞、初級精母細胞、次級精母細胞和精子細胞)，蟲體多侵入生精細胞的胞質(zhì)內(nèi)，少數(shù)侵入胞核內(nèi)，睪丸間質(zhì)細胞和支持細胞中也有蟲體侵入。在附睪管壁上皮細胞和管腔內(nèi)的精液中檢

6、測到蟲體。統(tǒng)計分析顯示，睪丸及附睪內(nèi)的弓形蟲數(shù)目隨著感染時間的延長而明顯增加，不同感染時間點同一組織內(nèi)速殖子的數(shù)目差別具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，而在同一感染時間睪丸及附睪內(nèi)的弓形蟲數(shù)目差別無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 2.睪丸組織超微結(jié)構(gòu)的改變：感染組小鼠睪丸精原細胞層變薄，精子數(shù)減少；生精細胞線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、溶酶體等細胞器的數(shù)量減少，有的生精細胞中染色質(zhì)溶解，細胞器消失，并可見畸形精子：支持細胞間隙增寬，有的細胞核濃縮

7、，精母細胞與支持細胞分界處的細胞器減少、空泡化，間隙增大。 3.單細胞凝膠電泳發(fā)現(xiàn)感染組小鼠的睪丸細胞有彗星圖像形成，彗星圖像分析顯示各感染組與陰性對照組的尾矩和Olive尾矩相比較有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，且隨著攻蟲數(shù)量的增加尾矩和Olive尾矩值也相應增加。 4.弓形蟲感染BALB/c小鼠可導致小鼠血清及睪丸局部的氧自由基(NO，·OH，O2-)水平升高，且血清和睪丸的氧自由基水平同步升高；血清和睪丸中的超氧化物