1、目的：探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激(ERS)在硫化氫(H2S)調(diào)節(jié)脂多糖(LPS)誘導肝細胞凋亡中的作用；初步研究外源性H2S調(diào)節(jié)LPS誘導肝細胞ERS的分子機制。
　　方法：大鼠肝細胞系BRL細胞培養(yǎng)，用LPS、ERS誘導劑毒胡蘿卜素(TG)、ERS抑制劑4-苯基丁酸(4-PBA)分別或組合處理BRL細胞；用小干擾RNA(siRNA)技術(shù)沉默H2S生成酶胱硫醚-β-合酶(CBS)及胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)表達，H2S供體硫氫化鈉(NaHS

2、)與LPS共同處理肝細胞；分別用抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸(NAC)、KATP通道抑制劑格列苯脲(Gli)預處理細胞，再觀察NaHS與LPS的作用。用去蛋白法檢測細胞 H2S含量；用MTT比色法或臺盼藍拒染法檢測細胞活力；用Hoechst33258熒光染色確證細胞凋亡；用Annexin V-FITC/PI雙染流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡率；用Western blot檢測 ERS標志蛋白 GRP78和 ERS凋亡相關(guān)蛋白CHOP、caspase-

3、12和caspase-3蛋白表達。
　　結(jié)果：與溶劑對照組比較，LPS可劑量和時間依賴性引起肝細胞活力顯著降低、細胞凋亡率明顯增加，誘導GRP78以及CHOP、caspase-12和caspase-3蛋白表達上調(diào)；TG本身可引起肝細胞活力降低和細胞凋亡增加，能顯著加重LPS引起的肝細胞損傷；4-PBA可起細胞凋亡少量但明顯增加，明顯抑制了LPS引起的肝細胞凋亡增加；CBS siRNA、CSE siRNA能顯著抑制靜息肝細胞和LPS

4、引起肝細胞內(nèi)源性H2S生成，并抑制LPS引起肝細胞活力降低、細胞凋亡增加，翻轉(zhuǎn)了LPS引起GRP78和CHOP、caspase-12和caspase-3蛋白表達上調(diào)；NAC預處理能明顯降低 LPS引起的細胞活力降低、凋亡增加以及 GRP78和 CHOP、caspase-12和caspase-3蛋白表達上調(diào)，與NaHS共同作用具有協(xié)同效應；Gli預處理能明顯促進LPS引起的細胞活力降低、凋亡增加以及GRP78和CHOP、caspase-1

5、2和caspase-3蛋白表達上調(diào)，部分阻斷NaHS對LPS引起ERS的拮抗作用。
　　結(jié)論：LPS通過引起氧化應激而誘導肝細胞ERS，ERS參與介導LPS誘導的肝細胞凋亡；在本實驗條件下，內(nèi)源性H2S上調(diào)、外源性H2S抑制LPS引起的肝細胞ERS，從而調(diào)節(jié)LPS誘導的肝細胞凋亡變化；外源性H2S通過增強抗氧化效應、開放KATP通道抑制LPS引起的ERS上調(diào)，從而減少了LPS誘導的肝細胞凋亡增加；內(nèi)、外源性H2S對LPS誘導肝細胞