1、第一部分油酸誘導SW872前脂肪細胞分化為成熟的脂肪細胞 目的:觀察油酸對SW872前脂肪細胞的誘導分化作用 方法: 1.光學顯微鏡觀察SW872前脂肪細胞形態(tài)的變化。 2.油紅0染色觀察胞漿中脂滴的聚集。 3.化學比色法測定細胞中甘油三酯的總量。 結果: 1.0.6mMoleicacid誘導分化刺激24h時，SW872前脂肪細胞胞體由大變小，形態(tài)由梭形變?yōu)閳@形；誘導分化刺激48h

2、時，細胞體積變大，幾乎所有細胞形態(tài)變園；誘導分化72h時，細胞呈戒環(huán)狀。 2.0.6mMoleicacid誘導分化刺激24h時，胞漿中出現細小的脂滴；誘導分化刺激48h時，胞漿中脂滴明顯增多；誘導分化72h時，胞漿脂滴含量更多，油紅0染色胞漿中可見豐富的脂肪染色。 3.0.6mMoleicacid誘導分化刺激24h時，細胞中甘油三酯總量增多；誘導分化刺激48h時，甘油三酯總量是分化前的8.5倍(p＜0.01)；誘導分化刺

3、激72h時，甘油三酯總量是分化前的14倍(p＜0.01)。 結論:0.6mMoleicacid刺激72h，能成功地將SW872前脂肪細胞誘導分化為典型的成熟脂肪細胞。 第二部分重組人白介素6對SW872脂肪細胞葡萄糖轉運及葡萄糖轉運體4蛋白表達及轉位的影響 目的:觀察重組人IL-6對SW872脂肪細胞葡萄糖轉運和葡萄糖轉運體4的蛋白表達及其轉位的影響，探討rhIL-6與脂肪細胞胰島素抵抗的關系及其機制；

4、同時觀察JAK2的抑制劑AG490及PI3K的抑制劑Wortmannin是否影響rhIL-6對SW872脂肪細胞葡萄糖轉運的抑制作用，以探討在SW872脂肪細胞PI3K信號系統(tǒng)與JAK/STAT信號系統(tǒng)是否存在信息交換。 方法: 1.采用2-脫氧-3H-D葡萄糖攝入法，觀察基礎狀態(tài)及胰島素刺激下，不同濃度rhIL-6對SW872脂肪細胞葡萄糖攝取率的影響。 2.激光共聚焦顯微鏡觀察GLUT4的蛋白表達，以觀察rh

5、IL-6對SW872脂肪細胞GLUT4蛋白表達的影響。 3.流式細胞術檢測細胞膜GLUT4的蛋白含量，觀察胰島素刺激下，rhIL-6對SW872脂肪細胞GLUT4轉位的影響。 結果: 1.在基礎狀態(tài)及胰島素刺激下，1ng/mlrhIL-6作用24h，對SW872脂肪細胞葡萄糖攝取率無影響；5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、50ng/mlrhIL-6使基礎狀態(tài)及胰島素刺激下SW872脂肪細胞葡萄糖攝取率

6、分別下降16.6％vs20.9％、28.5％vs36.0％、39.5％vs50.1％、47.6％vs57.1％。2.Jak2抑制劑AG490預處理，使rhIL-6對SW872脂肪細胞在基礎狀態(tài)及胰島素刺激下葡萄糖轉運的抑制作用分別降低20％及33％。PI3K抑制劑Wortmannin預處理，增加基礎狀態(tài)及胰島素刺激下rhIL-6對SW872脂肪細胞葡萄糖轉運的抑制作用。 3.20ng/mlrhIL-6作用24h，抑制SW872脂

7、肪細胞GLUT4的蛋白表達，與對照組相比P＜0.01。 4.20ng/mlrhIL-6作用24h，SW872脂肪細胞細胞膜GLUT4蛋白含量明顯降低，與對照組相比P＜0.01。 結論: 1、rhIL-6抑制基礎狀態(tài)及胰島素刺激下SW872脂肪細胞葡萄糖轉運，對胰島素刺激條件下的葡萄糖轉運的抑制作用更明顯，且呈劑量相關效應。 2、在SW872脂肪細胞JAK/STAT信號系統(tǒng)及PI3K信號系統(tǒng)存在交互作用。3

8、、rhIL-6抑制SW872脂肪細胞GLUT4的蛋白表達。 4、rhIL-6抑制SW872脂肪細胞GLUT4的轉位。 5、rhIL-6降低SW872脂肪細胞對胰島素的敏感性，誘導胰島素抵抗的形成。 第三部分重組人白介素6對SW872脂肪細胞細胞因子基因和蛋白表達的影響 目的:觀察rhIL-6對SW872脂肪細胞細胞因子(脂聯(lián)素、抵抗素、促酰化蛋白及白介素6)基因及蛋白表達的影響，以探討rhIL-

9、6對脂肪細胞分泌功能的調節(jié)作用。 方法; 1.ELISA方法檢測細胞培養(yǎng)上清中脂聯(lián)素及促酰化蛋白的含量。 2.RT-PCR方法檢測SW872脂肪細胞脂聯(lián)素、抵抗素、白介素6的mRNA水平。 結果: 1.對脂聯(lián)素的影響：1ng/ml及5ng/mlrhIL-6作用24h，對SW872脂肪細胞脂聯(lián)素基因及蛋白的表達無影響；10ng/ml、20ng/ml及50ng/mlrhIL-6作用24h，抑制SW87

10、2脂肪細胞脂聯(lián)素基因及蛋白的表達。20ng/mlrhIL-6作用4h，對SW872脂肪細胞脂聯(lián)素基因及蛋白的表達無影響；隨著作用時間的延長，rhIL-6抑制SW872脂肪細胞脂聯(lián)素mRNA及蛋白的表達，且對轉錄水平的抑制作用更強。 2.對白介素6的影響：1ng/mlrhIL-6作用24h，對SW872脂肪細胞IL-6mRNA的表達無影響，隨著rhIL-6濃度的增加，可促進SW872脂肪細胞IL-6mRNA的表達，但以20ng/m

11、lrhIL-6的作用最強；20ng/mlrhIL-6作用4h即可促進SW872脂肪細胞IL-6mRNA的表達，隨著作用時間的延長其促進作用更加明顯。 3.對抵抗素的影響：不同濃度及不同作用時間，rhIL-6對SW872脂肪細胞抵抗素mRNA的表達無明顯影響，與對照組相比P＞0.05。 4.對促酰化蛋白的影響：1ng/mlrhIL-6作用24h對SW872脂肪細胞ASP的分泌沒有影響；而5ng/ml、10ng/ml、20n

12、g/ml、50ng/mlrhIL-6作用24h對SW872脂肪細胞ASP的分泌具有不同程度的抑制作用，且隨rhIL-6濃度的增加對ASP分泌的抑制作用越明顯。20ng/mlrhIL-6作用4h即對SW872脂肪細胞ASP的分泌即有抑制作用，且隨著作用時間的延長抑制作用更明顯，但以rhIL-6作用12h對ASP分泌的抑制作用最明顯。 結論: 1.rhIL-6以劑量和時間相關的方式，抑制SW872脂肪細胞脂聯(lián)素mRNA及蛋白

13、的表達。 2.rhIL-6以劑量和時間相關的方式促進SW872脂肪細胞IL-6mRNA表達。表明在SW872脂肪細胞IL-6以劑量和時間相關的方式誘導自身的表達，脂肪細胞IL-6mRNA表達受自分泌正反饋調節(jié)。 3.rhIL-6以劑量和時間相關的方式，抑制SW872脂肪細胞促?；鞍椎姆置?。4.rhIL-6對SW872脂肪細胞抵抗素mRNA的表達無影響。 5.rhIL-6通過影響SW872脂肪細胞細胞因子的表達而