1、目的：以20mJ/cm2UVB輻射體外培養(yǎng)的HaCaT細(xì)胞建立細(xì)胞損傷模型，研究扇貝多肽(PCF)在UVB損傷HaCaT細(xì)胞中的抗凋亡作用及其作用機(jī)制。方法：細(xì)胞實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分為6組：對照組、UVB模型組、UVB+0.5％PCF組(PCF1組)、UVB+0.25％PCF組(PCF2組)、UVB+0.125％PCF組(PCF3組)、UVB+0.1％(VitC組)。 HaCaT細(xì)胞與PCF或VitC孵育2小時后，接受UVB照射。除Caspase

2、-3外，其它實(shí)驗(yàn)均于照射后18小時進(jìn)行：不同劑量(5、10、15、20mJ/cm2)UVB輻射，確定輻射參數(shù)；瓊脂糖凝膠電泳觀察各組不加入或預(yù)先分別加入ERK抑制劑(PD98059)、JNK抑制劑(SP600125)、p38抑制劑(SB203580)和Caspase-3抑制劑(DEVD-FMK)后的DNA ladder；流式細(xì)胞儀檢測Caspase-3的含量；western-blot檢測磷酸化ERK、JNK、和p38的活性；應(yīng)用基因芯片

3、技術(shù)檢測PCF預(yù)處理的UVB輻射HaCaT細(xì)胞的基因表達(dá).結(jié)論：以輻射強(qiáng)度20mJ/cm2為參數(shù)，PCF抑制UVB誘導(dǎo)的HaCaT細(xì)胞凋亡。PCF的抗凋亡作用是通過降低細(xì)胞內(nèi)Caspase-3含量、提高磷酸化ERK的活性、抑制磷酸化JNK及磷酸化p38的活性來實(shí)現(xiàn)的。細(xì)胞周期調(diào)控基因p27和p15、凋亡相關(guān)基因NDRG1，p8，STK3和TP53INP1、抗細(xì)胞損傷基因GPX和p44及細(xì)胞增殖和能量代謝相關(guān)基因均參與了PCF的抗凋亡作用