1、目的： 研究沙門菌屬外膜蛋白(OuterMembraneProtein，OMP)激化巨噬細胞的作用及對機體的免疫保護作用。 方法： 利用十二烷基肌氨酸鈉法提取傷寒沙門菌(Salmonellatyphi)、甲型付傷寒沙門菌(SalmonellaparatyphiA)、鼠傷寒沙門菌(Salmonellatyphimurium)、腸炎沙門菌(Salmonella鯽teritidis)外膜蛋白，并用聚丙烯酰胺凝膠電泳(S

2、DS-PAGE)分析所提取的外膜蛋白的組分。沖洗小鼠腹腔，利用巨噬細胞貼壁生長的特性獲得小鼠腹腔巨噬細胞；傷寒沙門菌外膜蛋白和傷寒沙門菌分別與小鼠腹腔巨噬細胞相互作用，檢測不同時間點(2h、12h、24h、36h、48h)巨噬細胞分泌細胞因子IL-1α、TNF-α、IL-12的變化；預(yù)先用OMP刺激小鼠腹腔巨噬細胞，體外觀察比較巨噬細胞內(nèi)沙門菌存活數(shù)量。用鼠傷寒沙門菌OMP與弗氏完全佐劑、弗氏不完全佐劑制成乳油狀，按照免疫程序多次多部位

3、免疫新西蘭兔，獲得抗OMP抗體血清；以酶聯(lián)免疫吸附法測定兔抗鼠傷寒沙門菌OMP抗體血清的效價；抗體血清以35％飽和硫酸銨溶液沉淀，以pH7.4的lOmMPBS透析純化；蛋白免疫印跡法(Western-B10t)分析兔抗鼠傷寒沙門菌OMP抗體與傷寒沙門菌(5)~7monellatyphi)、甲型付傷寒沙門菌(SalmonellaparatyphiA)、鼠傷寒沙門菌(Salmonellatyphimurium)OMP抗原的反應(yīng)特異性。采用R

4、eed和Muench方法計算小鼠對鼠傷寒沙門菌的半數(shù)致死量(LD50)。小鼠經(jīng)鼠傷寒沙門菌OMP免疫后，分別用100LD50、500LD50、1000LD50鼠傷寒沙門菌攻擊小鼠，觀察小鼠的存活率，分析鼠傷寒沙門菌OMP誘導(dǎo)小鼠的主動免疫保護；小鼠經(jīng)兔抗鼠傷寒沙門菌OMP抗血清免疫后，分別用50LD50、100LD50鼠傷寒沙門菌攻擊小鼠，觀察小鼠的存活率，分析鼠傷寒沙門菌OMP誘導(dǎo)小鼠的被動免疫保護；小鼠經(jīng)鼠傷寒沙門菌OMP免疫后，后

5、足摯注射鼠傷寒沙門菌，觀察小鼠足墊腫脹變化，分析鼠傷寒沙門菌OMP誘導(dǎo)小鼠的遲發(fā)性超敏反應(yīng)情況。 結(jié)果： 1、傷寒沙門菌菌株、甲型付傷寒沙門菌、鼠傷寒沙門菌、腸炎沙門菌外膜蛋白都具有多種組成成分，經(jīng)SDS-PAGE分析，具有分子量大約為23KD、33KD、41KD、53KD的多條條帶。 2、蛋白免疫印跡法(Western-Blot)分析顯示兔抗鼠傷寒沙門菌OMP抗體與傷寒沙門菌、甲型付傷寒沙門菌、鼠傷寒沙門菌OM

6、P抗原在分子量大約為23KD具有共同的顯色條帶。 3、傷寒沙門菌OMP誘導(dǎo)巨噬細胞IL-1α、TNF-α、IL-12的分泌，并隨時間而變化：IL-1α在36h達到分泌高峰，TNF-α在12h達到分泌高峰，IL-12在選定的最遲監(jiān)測時間點(48h)仍呈上升狀態(tài)；這與傷寒沙門菌刺激巨噬細胞后IL-1α、TNF-α、IL-12的變化有區(qū)別：IL-1α、TNF-α峰濃度有差異(p＜0．05)，IL-12達到峰濃度時間不同；傷寒沙門菌OM

7、P與巨噬細胞作用后減少巨噬細胞內(nèi)存活菌的數(shù)量(p＜0．05)。 4、采用鼠傷寒沙門菌免疫新西蘭兔可以獲得效價為1：2048的兔抗鼠傷寒沙門菌OMP抗體血清。 5、按照Reed和Muench方法，小鼠對鼠傷寒沙門菌的半數(shù)致死量(LD50)為1．56×104CFU。 6、小鼠經(jīng)鼠傷寒沙門菌OMP免疫后，能100％保護iOOLD50、500LD50的鼠傷寒沙門菌的攻擊，甚至對1000LD50的鼠傷寒沙門菌的攻擊的存活率

8、也有83％(5／6)。 7、小鼠經(jīng)抗鼠傷寒沙門菌OMP抗血清免疫后，能l00％保護50LD50、1OOLD50(最大試驗菌落數(shù))的鼠傷寒沙門菌的攻擊。 8、小鼠經(jīng)鼠傷寒沙門菌OMP免疫后，后足墊注射鼠傷寒沙門菌，24h足墊腫脹程度與對照組比較p＜0．001，兩組具有明顯差異。 結(jié)論： 沙門菌屬外膜蛋白具有能刺激巨噬細胞產(chǎn)生細胞因子，并激活巨噬細胞殺滅沙門菌的特性；通過動物接種可使被接種動物抵抗沙門菌的攻擊