1、單純皰疹病毒(Herpes Simplex Virus，HSV)為皰疹病毒科的典型代表，分為HSV-I和HSV-II兩種血清型。HSV-I是散發(fā)性腦炎和角膜炎常見的病因。HSVI感染對(duì)于免疫抑制患者(妊娠期婦女)和新生兒可以引起嚴(yán)重的并發(fā)癥。由于缺乏有效的預(yù)防措施，HSV-I感染妊娠期婦女的早期有效的診斷對(duì)于阻斷垂直傳播尤其重要。目前，HSV-I抗體的檢測(cè)是臨床上最常用的檢測(cè)HSV-I感染的方法。 為提高HSV-I抗體檢測(cè)的靈敏

2、性、特異性和準(zhǔn)確性，我們擬制備HSV-I型特異性包膜糖蛋白G(gGI)的重組蛋白抗原及其相應(yīng)的單克隆抗體(McAb)，并將其用于相應(yīng)ELISA檢測(cè)試劑盒，以促進(jìn)HSV-I型特異性血清學(xué)檢測(cè)的進(jìn)一步發(fā)展。圍繞上述目的，我們進(jìn)行了如下研究工作： 一、gGI基因片段的克隆及重組質(zhì)粒的構(gòu)建 根據(jù)GenBank中已公布的HSV-I不同毒株gGI基因序列的同源部分，用軟件自行設(shè)計(jì)一對(duì)引物，用此引物對(duì)目的基因片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增，產(chǎn)物包

3、含了gGI免疫優(yōu)勢(shì)氨基酸序列(第112～127aa)的對(duì)應(yīng)基因片段，然后對(duì)純化的PCR產(chǎn)物與pGEX-4T-1載體質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶EcoR I和Sal I進(jìn)行雙酶切并純化回收，隨后對(duì)回收產(chǎn)物進(jìn)行連接，構(gòu)建pGEX-4T-1/gGI重組質(zhì)粒，并對(duì)重組質(zhì)粒進(jìn)行篩選鑒定，最終獲得內(nèi)含高度保守目的基因片段的重組質(zhì)粒。 二、GST/gGI融合蛋白的表達(dá)純化及特性鑒定 將pGEX-4T-1/gGI重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主大腸桿菌BL2

4、1(DE3)，然后用異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE電泳檢測(cè)驗(yàn)證后，對(duì)存在于超聲離心后上清液中的融合蛋白用親和層析技術(shù)進(jìn)行純化，并用ELISA間接法對(duì)純化的GST/gGI融合蛋白的特性進(jìn)行鑒定，最終獲得保留天然蛋白抗原性和特異性的重組蛋白。 三、gGI重組蛋白單克隆抗體的制備 經(jīng)動(dòng)物免疫后，參考抗體效價(jià)挑選合適的BALB/c鼠進(jìn)行了細(xì)胞融合，并于適當(dāng)時(shí)機(jī)對(duì)雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行篩選，遺憾的是